西達本胺抑制骨髓瘤細胞自噬并促進DDR相關(guān)的凋亡反應.pdf

1、目的：
　　表觀遺傳學是近年來遺傳學的研究熱點。組蛋白氨基酸殘端的甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化修飾等可以通過改變組蛋白和DNA的相互親和力從而導致基因轉(zhuǎn)錄發(fā)生改變。多項研究表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與組蛋白乙?；癄顟B(tài)（由組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶HAT和組蛋白去乙?；窰DAC共同調(diào)控）關(guān)系密切。組蛋白去乙?；敢种苿℉DACi）作為一種特異性靶向抗腫瘤藥物越來越引起人們的關(guān)注，目前FDA已批準 HDAC抑制劑伏立諾他（Vorinostat，

2、SAHA）和羅咪酯肽（Romidepsin）用于治療皮膚及外周T細胞淋巴瘤，批準帕比司他（Panobinostat）治療多發(fā)性骨髓瘤。
　　多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一種漿細胞惡性腫瘤，臨床上經(jīng)過DNA損傷性化療、蛋白酶體抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑（沙利度胺或來那度胺）及大劑量化療聯(lián)合自體干細胞移植等治療后，大多數(shù)患者最終仍出現(xiàn)疾病復發(fā)或者進展，因此，尋找更有效的治療手段一直是MM治療領(lǐng)域的研究熱點。西達本胺

3、是我國第一個自主研發(fā)的組蛋白去乙酰化酶抑制劑（HDACi），可以抑制 HDAC1、2、3和10亞型的活性。在晚期腫瘤患者的Ⅰ期臨床研究中，西達本胺體現(xiàn)了良好的耐受性，目前已有研究證明，西達本胺對肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌及淋巴瘤有抑制或殺傷活性，我國正在開展針對皮膚T細胞淋巴瘤（PTCL）及外周T細胞淋巴瘤（CTCL）的Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗，初步統(tǒng)計結(jié)果提示療效十分顯著。綜上述，HDACi（如伏立諾他、羅咪酯肽、帕比司他）均有抗M

4、M活性，但單藥治療顯示出了劑量依賴性的副作用，使得HDACi治療骨髓瘤收到了限制；同時西達本胺治療難治復發(fā)型PTCL顯示出了極好的療效。因此，我們設(shè)想MM的乙?；癄顟B(tài)與MM細胞活性密切相關(guān)，目前有關(guān)西達本胺抗MM活性尚未見相關(guān)報道，故本課題選擇人多發(fā)性骨髓瘤細胞系RPMI8226、H929為實驗對象，觀察西達本胺對人多發(fā)性骨髓瘤細胞的抑制作用并探索其可能的機制。
　　方法：
　?、費TT法研究組蛋白去乙酰化酶抑制劑西達本胺對

5、RPMI8226及H929細胞增殖的影響；②流式細胞術(shù)檢測西達本胺作用后細胞凋亡率的變化及細胞周期分布情況；③RT-PCR檢測西達本胺對MM細胞SIRT1基因、自噬相關(guān)基因mRNA表達的影響；④Western blot法檢測西達本胺處理MM細胞48h后周期相關(guān)蛋白p21、自噬相關(guān)蛋白、DNA損傷相關(guān)蛋白及凋亡相關(guān)蛋白表達情況；⑤采用 ATM激酶特異性抑制劑KU-55933抑制ATM激酶活性，研究ATM在西達本胺調(diào)控MM細胞增殖中的作用。

6、結(jié)果：
　?、傥鬟_本胺顯著抑制MM細胞的增殖；②西達本胺上調(diào)p21蛋白，使細胞周期阻滯于G0/G1期；③西達本胺處理后的MM細胞DNA損傷相關(guān)蛋白γH2AX、pATM及凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase-3表達水平升高；④KU-55933抑制ATM激酶活性后，部分逆轉(zhuǎn)由西達本胺誘導的MM細胞DNA損傷和凋亡反應；⑤西達本胺抑制SIRT1基因的轉(zhuǎn)錄及表達，上調(diào)組蛋白 H4K16的乙?；?；⑥西達本胺下調(diào)自噬相關(guān)基因ATG7