PKCδ在垂體GH腺瘤細(xì)胞內(nèi)異常信號(hào)通路中的調(diào)控機(jī)制及其與SSTA療效的關(guān)系.pdf

1、第一部分PKCδ相關(guān)信號(hào)通路因子在體外原代培養(yǎng)垂體GH腺瘤胞內(nèi)的表達(dá)
　　目的：探究原代培養(yǎng)人垂體GH腺瘤細(xì)胞的方法，證實(shí)PKCδ及其相關(guān)信號(hào)通路因子表達(dá)于人垂體GH腺瘤細(xì)胞胞內(nèi)。
　　方法：收集5例垂體生長(zhǎng)激素腺瘤患者術(shù)中切除腫瘤組織，同時(shí)行原代細(xì)胞培養(yǎng)及常規(guī)石蠟包埋切片，免疫熒光及免疫組化法檢測(cè)PKCδ、CREB、ERK1/2蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：靜置24小時(shí)后，可見(jiàn)觀察到原代細(xì)胞呈圓形透亮狀貼壁生長(zhǎng)，可呈“

2、鋪路石”樣外觀。免疫組化及免疫熒光法證實(shí)PKCδ及ERK1/2主要表達(dá)于胞質(zhì)。CREB主要表達(dá)于胞核，不同樣本之間表達(dá)水平存在個(gè)體差異。
　　結(jié)論：成功獲得體外原代培養(yǎng)人垂體GH腺瘤細(xì)胞，PKCδ、CREB、ERK1/2均表達(dá)于人垂體GH腺瘤細(xì)胞內(nèi)，且表達(dá)水平存在個(gè)體差異。
　　第二部分PKCδ相關(guān)信號(hào)通路因子在垂體GH腺瘤原代培養(yǎng)細(xì)胞模型中作用及調(diào)節(jié)機(jī)制研究
　　目的：探究PKCδ相關(guān)信號(hào)通路因子在垂體GH腺瘤原代培

3、養(yǎng)細(xì)胞模型中的作用及調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：使用PMA、Rottlerin及兩者聯(lián)合分別干預(yù)原代培養(yǎng)的人垂體GH腺瘤細(xì)胞，GH-Elisa檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)分組細(xì)胞分泌GH水平變化，CCK-8檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)分組細(xì)胞活性變化，Western blot檢測(cè)PKCδ、CREB、ERK1/2蛋白磷酸化水平變化
　　結(jié)果：加入PMA后，細(xì)胞GH分泌及活化增殖水平上調(diào)，p-PKCδ、p-CREB以及p-ERK1/2的磷酸化水平均呈不同程度上調(diào)趨勢(shì)；而

4、加入Rottlerin后，細(xì)胞GH分泌及活化增殖水平下降，p-PKCδ、p-CREB以及p-ERK1/2的磷酸化水平均呈不同程度下降趨勢(shì)，上述兩組與對(duì)照組相比p值均<0.05，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。聯(lián)合使用PMA及Rottlerin后，較之單純使用PMA，細(xì)胞GH分泌及活化增殖水平下降，p-CREB以及p-ERK1/2均呈不同程度下降趨勢(shì)；但較之單純使用Rottlerin，細(xì)胞GH分泌及活化增殖水平上調(diào)，p-CREB以及p-ERK1/2均呈不

5、同程度上調(diào)趨勢(shì)，上述p值均<0.05，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：在原代培養(yǎng)的人垂體GH腺瘤中，激活PKCδ不僅可輕微提高CREB的磷酸化水平并部分促進(jìn)GH分泌的效應(yīng)，同時(shí)可提升ERK1/2的磷酸化水平并增強(qiáng)細(xì)胞的增殖效應(yīng)。但鑒于不同原代樣本間存在較大個(gè)體差異，上述結(jié)論尚需擴(kuò)充例數(shù)以便進(jìn)一步研究證實(shí)。
　　第三部分SSTA療效與PKCδ相關(guān)信號(hào)通路的相互作用及其與gsp癌基因的關(guān)系
　　目的：探究SSTA療效與PKCδ

6、相關(guān)信號(hào)通路因子的關(guān)系，及其與gsp癌基因的聯(lián)系
　　方法：使用SSTA干預(yù)原代培養(yǎng)的人垂體GH腺瘤細(xì)胞，GH-Elisa檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)分組細(xì)胞分泌GH水平變化，CCK-8檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)分組細(xì)胞活性變化，Western blot檢測(cè)PKCδ、CREB、ERK1/2蛋白磷酸化水平變化。同時(shí)篩選20例體內(nèi)及體外SSTA抑制效果一致的垂體GH腺瘤患者資料，通過(guò)PCR法檢測(cè)gsp突變情況。
　　結(jié)果20例樣本中，SSTA有效13例，其中g(shù)s

7、p癌基因陽(yáng)性6例，陰性7例；無(wú)效7例，均為gsp癌基因陰性。gsp癌基因（+）病例組GH分泌抑制效果優(yōu)于gsp癌基因（-）病例組，但進(jìn)一步行χ2檢驗(yàn)示p值>0.05，提示gsp陽(yáng)/陰性樣本間SSTA有效率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。使用SSTA干預(yù)原代培養(yǎng)的人垂體GH腺瘤細(xì)胞后，細(xì)胞GH分泌及活化增殖水平下降，同時(shí)p-PKCδ、p-CREB以及p-ERK1/2均呈不同程度下降趨勢(shì)
　　結(jié)論：SSTA作用于原代培養(yǎng)的人垂體GH腺瘤細(xì)胞后，細(xì)胞