PKC-ERK信號(hào)通路在丙泊酚調(diào)控新生大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的作用研究.pdf

1、目的:研究丙泊酚對(duì)新生SD大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　方法:體外分離培養(yǎng)新生SD大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)，免疫熒光法鑒定神經(jīng)干細(xì)胞。
　　不同濃度的丙泊酚(0，5，10，20，40，80μM)分別處理神經(jīng)干細(xì)胞，WST-1法檢測(cè)NSCs增殖活性，BrdU摻入法檢測(cè)NSCs增殖率，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞膜PKCα和細(xì)胞pERK1/2蛋白的表達(dá)。
　　神經(jīng)干細(xì)胞分為5組給

2、藥:空白對(duì)照組、脂肪乳對(duì)照組、20μM丙泊酚組、20μM維拉帕米組、20μM丙泊酚+20μM維拉帕米組，WST-1法檢測(cè)NSCs增殖活性，BrdU摻入法檢測(cè)NSCs增殖率，免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞膜PKCα和細(xì)胞pERK1/2蛋白的表達(dá)。
　　神經(jīng)干細(xì)胞分為6組給藥:空白對(duì)照組、DMSO對(duì)照組、脂肪乳對(duì)照組、20μM丙泊酚組、10μM Chelerythrine組、20μM丙泊酚+10μM Chelerythrine組，WST-1法檢測(cè)

3、NSCs增殖活性，BrdU摻入法檢測(cè)NSCs增殖率，免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞pERK1/2蛋白的表達(dá)。
　　神經(jīng)干細(xì)胞分為6組給藥:空白對(duì)照組、DMSO對(duì)照組、脂肪乳對(duì)照組、20μM丙泊酚組、20μM PD98059組、20μM丙泊酚+20μM PD98059組，采用WST-1法檢測(cè)NSCs增殖活性，BrdU摻入法檢測(cè)NSCs增殖率。
　　結(jié)果:分離培養(yǎng)的新生SD大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)狀況良好，懸浮生長(zhǎng)，細(xì)胞聚集成團(tuán)，形成圓形的神

4、經(jīng)球。傳代之后繼續(xù)培養(yǎng)6天的神經(jīng)球呈巢蛋白(Nestin)免疫反應(yīng)陽(yáng)性，采用10％胎牛血清誘導(dǎo)分化，多分化為呈神經(jīng)元核蛋白(neuronal nuclei，NeuN)免疫反應(yīng)陽(yáng)性的神經(jīng)元和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein，GFAP）免疫反應(yīng)陽(yáng)性的星型膠質(zhì)細(xì)胞。
　　與0μM組相比，丙泊酚（5，10，20，40，80μM）顯著抑制了神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，降低了細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，抑制鈣離子依賴

5、的PKCα活化，降低神經(jīng)干細(xì)胞pERK1/2的表達(dá)，且濃度增大，抑制作用增強(qiáng)。
　　丙泊酚和維拉帕米處理細(xì)胞之后，與空白對(duì)照相比，脂肪乳對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、PKCα活化、pERK1/2的表達(dá)均無(wú)顯著影響;丙泊酚或維拉帕米單獨(dú)使用均能顯著抑制神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，抑制鈣離子依賴的PKCα活化，減少神經(jīng)干細(xì)胞pERK1/2的表達(dá)，并且維拉帕米比丙泊酚的抑制作用更強(qiáng);而二者聯(lián)合應(yīng)用處理神經(jīng)干細(xì)胞后，與丙泊酚組相比，維拉帕米顯著增強(qiáng)了丙泊酚的

6、抑制效應(yīng);而與維拉帕米組相比，丙泊酚并未顯著增強(qiáng)維拉帕米的抑制效應(yīng)。
　　丙泊酚和Chelerythrine處理細(xì)胞之后，與空白對(duì)照相比，無(wú)論DMSO或者脂肪乳對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、pERK1/2的表達(dá)均未有顯著影響;丙泊酚或Chelerythrine單獨(dú)使用均能顯著抑制神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，下調(diào)神經(jīng)干細(xì)胞pERK1/2的表達(dá)，且Chelerythrine比丙泊酚的抑制作用更強(qiáng);而二者聯(lián)合應(yīng)用處理神經(jīng)干細(xì)胞后，與丙泊酚組相比，Chele

7、rythrine顯著增強(qiáng)了丙泊酚的抑制效應(yīng);而與Chelerythrine組相比，丙泊酚并未顯著增強(qiáng)Chelerythrine的抑制效應(yīng)。
　　丙泊酚和PD98059處理細(xì)胞之后，與空白對(duì)照組相比，無(wú)論DMSO或者脂肪乳對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖均無(wú)顯著影響，丙泊酚或PD98059單獨(dú)使用均能顯著抑制神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，并且PD98059比丙泊酚的抑制作用更強(qiáng);而二者聯(lián)合應(yīng)用處理神經(jīng)干細(xì)胞后，與丙泊酚組相比，PD98059顯著增強(qiáng)了丙泊酚的