宮頸癌細胞中免疫球蛋白G通過結合TLR4促進LPS誘導產(chǎn)生促炎性因子.pdf

1、背景和目的：
　　經(jīng)典的理論認為僅僅B淋巴細胞和漿細胞能產(chǎn)生免疫球蛋白，但這種理論目前正在受到挑戰(zhàn)。新近的研究表明許多癌細胞表達免疫球蛋白G（IgG）。然而，癌源性IgG的功能和暗含的機制目前還不清楚。Toll樣受體（TLRs）在天然免疫中起到關鍵作用，它可以識別來源于微生物的具有保守結構的分子。在TLRs中，TLR4是一個關鍵的成員，它通過激活信號通路啟動天然免疫反應。最近的研究顯示，TLR4不僅在免疫細胞中表達，在癌細胞中也表

2、達如宮頸癌，肺癌，乳腺癌等等。TLR4在多種癌細胞中的表達暗示了TLR4信號通路可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及免疫過程中起到了關鍵作用。因此，本研究對癌源性IgG是否與TLR4相互作用以及其作用機制進行了深入地研究。
　　材料與方法：
　　1.材料BALB/c裸鼠（4-6周，雌性）購買于維通利華實驗動物技術有限公司（北京，中國）。人宮頸癌組織和他們的正常組織來自汕頭大學附屬腫瘤醫(yī)院，該研究項目獲得汕頭大學醫(yī)學院倫理委員會的批準。人

3、宮頸癌細胞系HeLa和SiHa均購自ATCC。
　　2.免疫印跡蛋白樣品加入相應體積loading buffer后,100℃煮5分鐘,經(jīng)SDS PAGE膠電泳分離后，轉移到硝酸纖維素膜上。膜用5％BSA封閉后2小時后，一抗在4℃旋轉過夜，第二天早上孵育相應的二抗后，用Odyssey遠紅外掃描儀掃描。
　　3.酶聯(lián)免疫分析:根據(jù)ELISA kit的說明書檢測細胞上清液中的TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白水平。
　　

4、結果：
　　1.在LPS刺激后的宮頸癌細胞中IgG表達動力學；
　　2.在宮頸癌細胞中沉默IgG抑制LPS誘導產(chǎn)生促炎性因子；
　　3.在宮頸癌細胞中IgG表達下調(diào)抑制LPS激活的TLR4信號通路；
　　4.在宮頸癌細胞中IgG表達下調(diào)破壞LPS誘導的NF-κB核轉移和其應答元件的活性；
　　5.在宮頸癌細胞中LPS誘導IgG與TLR4相互作用；
　　6. IgG表達下調(diào)抑制TLR4的表達；
　

5、　7.在IgG表達下調(diào)的宮頸癌細胞中TLR4調(diào)節(jié)LPS誘導產(chǎn)生促炎性因子；
　　8.體內(nèi)實驗驗證IgG表達下調(diào)降低LPS誘導產(chǎn)生促炎性因子；
　　9.人宮頸癌組織中IgG和TLR4的表達與促炎性因子密切相關。
　　結論：
　　在本研究中，我們證明了在宮頸癌細胞中加入LPS后IgG的表達有了顯著地變化，在宮頸癌細胞中LPS誘導IgG與TLR4相互作用，這表明IgG有可能是受到TLR4信號通路的調(diào)控。IgG表達水平的

6、下調(diào)使LPS誘導產(chǎn)生的炎癥因子表達減弱。IgG的下調(diào)同時抑制了NF-κB和MAPK的磷酸化水平，從而破壞了NF-κB的核轉運以及應答元件的活性。因此，實驗結果表明在LPS刺激后TLR4能夠招募胞漿中的IgG，而IgG沉默是通過下調(diào)TLR4的表達抑制LPS誘導的炎癥因子的產(chǎn)生。
　　我們的發(fā)現(xiàn)表明IgG是通過結合和加強TLR4的表達來正性調(diào)控LPS誘導的促炎性因子的產(chǎn)生。IgG與TLR4的互動很可能在炎癥誘發(fā)癌癥的發(fā)展過程中會起到促