Aroclor1254對小鼠早期胚胎體外發(fā)育毒性的研究.pdf

1、本試驗從體外培養(yǎng)小鼠2-細胞胚胎開始，在小鼠胚胎體外培養(yǎng)液中加入不同濃度劑量的Aroclor 1254，探討Aroclor 1254對小鼠早期胚胎體外發(fā)育的影響，分析Aroclor 1254對小鼠早期胚胎發(fā)育的毒性機制。 1.篩選了適合昆白系小鼠胚胎體外發(fā)育的培養(yǎng)體系。選擇6，7，8，9和10周齡昆白系小鼠，進行超數(shù)排卵和配種，取出并計數(shù)2-細胞小鼠胚胎；將2.細胞胚胎分別放入體積分數(shù)10％的胎牛血清(FBS)、牛血清(BS)和

2、新生牛血清(NBS)的不同CZB培養(yǎng)液中取代牛血清白蛋白(BSA)，并設(shè)BSA對照組；在胚胎放入含10％NBS培養(yǎng)液的0，8，16和24 h的培養(yǎng)液中加入5.56mmol/L葡萄糖濃縮液。結(jié)果，6，7，8，9和10周齡每只小鼠平均獲取可用枚胚胎數(shù)分別為16.8，37.3，47.9，44.1和41.5枚，8周齡和9周齡小鼠可用胚率為90.9％和89.9％，顯著高于6周齡和7周齡可用胚率(p<0.05)；CZB培養(yǎng)液中含有體積分數(shù)為10％的

3、NBS的囊胚發(fā)育率(83.3％)和孵化率(71.4％)極顯著高于體積分數(shù)10％的FBS和BS組(30.6％，55.4％)和(18.8％，43.0％)(p<0.01)；不添加組，0，8，16和24 h將培養(yǎng)的胚胎移入含有5.56 mmol/L葡萄糖的CZB培養(yǎng)液的桑椹胚率分別為58.7％，0，75.9％，90.5％和78.8％，囊胚率分別為30.4％，0，53.1％，84.6％和41.7％，16 h組極顯著高于0，8 h和24 h組。結(jié)論

4、認為，8周齡和9周齡的小鼠超排效果最佳；FBS、BS都不能有效代替BSA，NBS可以代替BSA取得較理想的試驗結(jié)果；CZB中培養(yǎng)16 h換成含有葡萄糖的CZB液中培養(yǎng)，能更好的提高囊胚發(fā)育率(84.6％)。 2.探討Aroclor 1254對小鼠2-細胞胚胎體外發(fā)育的影響。將小鼠2-細胞，分別培養(yǎng)于Aroclor 1254濃度為0.05，0.25，1.25 μg/mL和6.25 μg/mL的胚胎培養(yǎng)液中，并設(shè)Aroclor 12

5、54溶劑對照組(添加乙醇)和空白對照組。結(jié)果表明，0.05 μg/mL的Aroclor1254會影響2-細胞胚的孵化(55.7％)，與溶劑對照組(66.7％)差異顯著(p<0.05)；0.25μg/mL的Aroclor 1254組，2-細胞胚的囊胚發(fā)育率(72.5％)及囊胚孵化率(23.2％)與溶劑對照組(84.2％，66.7％)差異極顯著(p<0.01)；1.25μg/mL的Aroclor 1254組，2.細胞胚發(fā)育到8-細胞階段的比

6、率(32.1％)極顯著低于對照組(p<0.01)；6.25μg/mL的Aroclor 1254組，2-細胞胚發(fā)育到4-細胞和8-細胞階段的比率(58.1％和29.6％)極顯著低于對照組(p<0.01)。結(jié)論認為，Aroclor 1254對小鼠2-細胞胚胎體外發(fā)育存在明顯的劑量-毒性關(guān)系，隨著培養(yǎng)液中Aroclor 1254濃度的增加，對小鼠早期胚胎的發(fā)育毒性表現(xiàn)地越早；胚齡越小，毒性敏感性越強。 3.探討Aroclor 1254

7、對小鼠8-細胞胚胎體外發(fā)育的影響。將小鼠8-細胞胚胎，分別培養(yǎng)于Aroclor 1254濃度為0.05，0.25，1.25 μg/mL和6.25μg/mL的胚胎培養(yǎng)液中，并設(shè)Aroclor 1254溶劑對照組(添加乙醇)和空白對照組。結(jié)果表明，0.05μg/mL的Aroclor 1254對8-細胞胚發(fā)育無明顯影響；0.25μg/mL的Aroclor 1254會影響8-細胞胚的孵化(64.7％)，與溶劑對照組差異顯著(p<0.05)；1.