TGF-β1對小鼠體外胚胎發(fā)育和胚胎種植的影響及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：觀察在小鼠胚胎體外培養(yǎng)系統(tǒng)中加入不同濃度TGF-β1對小鼠胚胎發(fā)育及胚胎種植的影響，并通過比較小鼠體內(nèi)發(fā)育囊胚與含不同濃度TGF-p1的小鼠胚胎培養(yǎng)基中生長囊胚β-半乳糖結(jié)合凝集素(galectin-1)表達(dá)水平的差異以及不同胚胎體外培養(yǎng)組(M16組和M16+TGF-β110ng/ml)囊胚移植后，母胎界面IL10/IFN-γ的不同，進(jìn)一步探討TGF-β1影響胚胎種植的作用機(jī)制。 方法： 1、比較小鼠2-細(xì)胞期

2、胚胎在不同胚胎培養(yǎng)組(M16組、M16+TGF-β1 1ng/ml、M16+TGF-β1 10ng/ml和M16+TGF-β1 50ng/ml組)培養(yǎng)第68及92小時早期囊胚、擴(kuò)張囊胚和孵出囊胚形成率；并于胚胎培養(yǎng)第68小時，將M16組和最適宜TGF-β1濃度組擴(kuò)張囊胚進(jìn)行胚胎移植，比較兩組移植小鼠胚胎種植率。 2、取兩組移植小鼠接受胚胎移植后第6天妊娠物進(jìn)行體外組織培養(yǎng)24小時，利用ELISA法測定培養(yǎng)上清液中IL-10/I

3、FN-γ的水平并進(jìn)行比較。 3、運(yùn)用實時熒光定量RT-PCR法比較體內(nèi)生長組與不同小鼠胚胎體外培養(yǎng)組(M16、M16+TGF-β1 1ng/ml和M16+TGF-β1 10ng/ml組)擴(kuò)張囊胚galectin-1表達(dá)水平的差異。 結(jié)果： 1、在小鼠胚胎培養(yǎng)基中加入TGF-β1可使小鼠胚胎早期囊胚、擴(kuò)張囊胚和孵出囊胚形成率提高，并且與培養(yǎng)基中TGF-β1濃度呈一定劑量相關(guān)性，其中TGF-β1濃度為10ng/

4、ml時對胚胎發(fā)育最有利，胚胎培養(yǎng)第68和92小時其早期囊胚、擴(kuò)張囊胚和孵出囊胚率分別為15.6％，68.09％，1.42％和6.38％,28.37％,53.19％。當(dāng)TGF-β1>50ng/ml時對胚胎發(fā)育的促進(jìn)作用減弱。 2、在M16+TGF-β1 10ng/ml組胚胎培養(yǎng)第68時進(jìn)行囊胚移植，受體鼠胚胎種植率明顯高于M16組(35.42％vs 17.19％，P<0.01)。 3、M16+TGF-β1 10ng/m

5、l組胚胎移植后第6天妊娠物體外培養(yǎng)上清液中IFN-γ水平低于M16組(30.89±11.31pg/ml vs 43.23±18.09pg/ml，P<0.05)。 4、小鼠體內(nèi)生長囊胚galectin-1表達(dá)水平高于M16體外培養(yǎng)組(△Ct=1.75±0.87 vs 3.12±0.63，P<0.05)；培養(yǎng)基中加入TGF-β1對體外培養(yǎng)小鼠胚胎galectin-1的表達(dá)無影響。 結(jié)論：在小鼠胚胎體外培養(yǎng)系統(tǒng)中加入適宜濃

6、度TGF-β1可有效提高體外培養(yǎng)小鼠胚胎移植后的胚胎種植率，其主要作用機(jī)制是通過提高體外培養(yǎng)胚胎質(zhì)量和胚胎發(fā)育速率，改善胚胎發(fā)育與子宮內(nèi)膜發(fā)育的同步性實現(xiàn)，并且可通過降低母胎界面IFN-γ水平，使Th1/Th2平衡向Th2偏移，進(jìn)而促進(jìn)妊娠的建立和維持。體內(nèi)生長囊胚galectin-1表達(dá)水平高于體外培養(yǎng)囊胚，這可能是造成體外培養(yǎng)胚胎種植率低，流產(chǎn)率高的原因之一，但通過向小鼠胚胎體外培養(yǎng)基中加入TGF-β1不能提高galectin-1的