應用巢式PCR技術(shù)快速鑒定石蠟組織中馬爾尼菲青霉.pdf

1、馬爾尼菲青霉(Penicillium marneffei，Pm)是一種雙相致病真菌，由其所致的馬爾尼菲青霉病(Penicilliosis marneffei，PSM)主要流行于東南亞和我國的南方地區(qū)，主要見于免疫缺陷患者，現(xiàn)已成為該地區(qū)人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染者的一種重要的繼發(fā)性感染。馬爾尼菲青霉侵犯人體的單核巨噬細胞系統(tǒng)，沒有特異的臨床表現(xiàn)，過去的確診常依賴于真菌培養(yǎng)，但

2、常使時間延誤。病理診斷有時易和其它巨噬細胞內(nèi)病原體混淆。近20年來隨著免疫抑制劑的廣泛應用、器官移植、獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)等所導致的免疫缺陷宿主不斷增多，馬爾尼菲青霉病的報道也日漸增多，而且發(fā)病區(qū)域有擴大趨勢。僅廣州已發(fā)現(xiàn)馬爾尼菲青霉病例近百余例，其中約50％以上與AIDS相關(guān)，已成為繼廣西省之后我國第二大馬爾尼菲青霉病的重要流行區(qū)域。由于該病發(fā)病隱匿，病

3、死率高達80％以上，并與AIDS高度相關(guān)，危害極大，所以已引起國內(nèi)外真菌專家的重視。 研究目的：探討單一(Single-PCR)和巢式多聚酶鏈反應(Nest-PCR)法特異性檢測馬爾尼菲青霉感染組織石蠟包埋標本的可行性并對比其敏感度。比較病理學檢查與PCR法臨床診斷馬爾尼菲青霉病的差異。 材料與方法：從14例經(jīng)臨床和病理確診為馬爾尼菲青霉病患者及10例攜帶馬爾尼菲青霉的野生竹鼠的石蠟包埋組織樣本中提取DNA，以基于馬爾尼

4、菲青霉的18S rRNA序列而設(shè)計的特異性引物進行單一和巢式多聚酶鏈反應，9例其它深部真菌病石蠟包埋組織樣本為陰性對照，其中包括3例孢子絲菌病、3例著色芽生菌病、1例組織胞漿菌病、1例曲霉病、1例隱球菌病及1例手術(shù)室取材的正常皮膚組織標本。 結(jié)果： 1.24例臨床確診深部真菌病患者及10例竹鼠的組織樣本外巢PCR擴增，可擴增出約為600bp條帶，正常皮膚組織未見條帶。14例經(jīng)臨床確診為馬爾尼菲青霉病患者及10例野生竹鼠的

5、石蠟包埋組織樣本通過單一和巢式PCR均擴增出約為400bp條帶，而其它深部真菌病石蠟包埋組織樣本均為陰性。 2.單一 PCR和巢式PCR的最低靈敏度檢測分別是14 pg/μl和14 fg/μl。巢式PCR的敏感度較單一 PCR高1000倍。 3.過碘酸(periodic acid-Schiff，PAS)病理染色法與PCR法診斷臨床馬爾尼菲青霉病結(jié)果的差異具有統(tǒng)計學意義。X2=17.143，P=0.000。 結(jié)論：