糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞因子與海馬突觸損害的關(guān)系及抗炎細(xì)胞因子IL-10的保護(hù)作用.pdf

1、慢性給予應(yīng)激水平的糖皮質(zhì)激素對海馬神經(jīng)元和突觸的影響 為探討慢性給予應(yīng)激水平糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid)對大鼠海馬的影響，在實(shí)驗(yàn)組大鼠飲用水中加入皮質(zhì)醇，使動物皮質(zhì)醇吸收量達(dá)10mg/kg/day，從而引起與應(yīng)激動物相同的皮質(zhì)醇水平，共21天，然后用免疫組織化學(xué)和Westernblot的方法觀察海馬Caspase-3、Synaptophysin(Syn)和Neurogranin(Ng)表達(dá)的變化。結(jié)果顯示：①與正常

2、組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬結(jié)構(gòu)中可見較多的細(xì)胞萎縮，海馬各CA區(qū)和DG區(qū)未見或偶見極個別Caspase-3免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞，但在下托和壓部后皮質(zhì)中，可見有較多的Caspase-3免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞；②與正常組Syn和Ng表達(dá)水平(1.2197±0.3443和1.9330±0.3450)相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬結(jié)構(gòu)中Syn和Ng的表達(dá)明顯減少(P＜0.05)，其表達(dá)水平分別為0.5512±0.0540和1.3375±0.3317。上述結(jié)果表明，慢性

3、給予應(yīng)激水平的糖皮質(zhì)激素可損傷海馬的功能，引起不依賴Caspase-3的海馬神經(jīng)細(xì)胞退變、使海馬突觸數(shù)量減少以及改變海馬突觸效能可能是其作用的部分機(jī)制。 第二部分 胸腺缺陷與海馬損害的關(guān)系研究 目的：探討胸腺缺陷與海馬損害的關(guān)系及其可能作用機(jī)制。方法：隨機(jī)選取10～12周齡、22～24周齡的雄性裸小鼠(Balb/c-nu/nu)各6只作實(shí)驗(yàn)組，以同周齡、同數(shù)量、同性別的正常Balb/c小鼠作對照組，用ELISA方

4、法檢測小鼠血清和海馬促炎細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量和Westernblot方法分析海馬突觸蛋白Synaptophysin(Syn)、Neurogranin(Ng)的表達(dá)水平。結(jié)果：①10～12周齡實(shí)驗(yàn)組小鼠血清促炎細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α含量分別為184.98±81.69pg/ml和113.16±6.60pg/ml，顯著高于同周齡對照組的71.81±9.76pg/ml(P＜0.05)和91.38±6.14(P＜

5、0.01)；②22～24周齡實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬促炎細(xì)胞因子IFN-γ含量(6.97±0.64pg/mg海馬組織)顯著高于同周齡對照組(5.72±0.31pg/mg海馬組織)(P＜0.01)；③22～24周齡實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬Syn表達(dá)水平顯著低于同周齡對照組(對照組為0.7044±0.0882，實(shí)驗(yàn)組為0.5513±0.1096，P＜0.05)，并伴有Ng表達(dá)水平的升高(對照組為1.3030±0.2607，實(shí)驗(yàn)組為1.7484±0.2191，P

6、＜0.01)。結(jié)論：胸腺缺陷會導(dǎo)致海馬功能的損害，其機(jī)制可能與其所致的促炎細(xì)胞因子水平增高有關(guān)。 第三部分 抗炎細(xì)胞因子IL-10對糖皮質(zhì)激素所致海馬突觸損害的保護(hù)作用 目的探討GC是否可通過引起促炎細(xì)胞因子作用增強(qiáng)來損害海馬，以及抗炎細(xì)胞因子IL-10對GC所致海馬損害的保護(hù)作用。方法①在原代培養(yǎng)的海馬細(xì)胞中給予皮質(zhì)醇8×10-6mol/L，12h后用RT-PCR的方法觀察其對海馬細(xì)胞促炎細(xì)胞因子IFN-γ表達(dá)

7、的影響；②構(gòu)建IL-10真核表達(dá)質(zhì)粒，并將其通過側(cè)腦室插管注射到正通過飲水給予皮質(zhì)醇(40mg/L，共21d)的Wistar大鼠腦中(80ng/20μl，每間隔4d注射1次，即在第1，5，9，13和17天注射)，然后用Westernblot的方法觀察其對海馬突觸蛋白SynapsinⅠ和Neurogranin(Ng)表達(dá)的影響。結(jié)果①皮質(zhì)醇可引起原代培養(yǎng)的海馬細(xì)胞促炎細(xì)胞因子IFN-γmRNA表達(dá)增加：皮質(zhì)醇組IFN-γmRNA表達(dá)水平為