一起青年學(xué)員急性傳染性肺炎暴發(fā)的病因?qū)W探究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:自2003年我國部分地區(qū)相繼先后出現(xiàn)嚴(yán)重急性呼吸綜合征(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)和禽流感(influent virus A-H5N1,H5N1)的流行以來,國內(nèi)外不斷有新的不明原因的發(fā)熱或傳染性肺炎局部暴發(fā)的報(bào)告,其中以肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,MP)感染多見。研究統(tǒng)計(jì)表明肺炎支原體感染占社區(qū)獲得性肺炎(Community-acquired pne

2、umonia,CAP)的50%。各型流感病毒及軍團(tuán)菌(Legionella pneumophila,L.Pneumophila)等也是社區(qū)獲得性肺炎的常見病原體之一。冬春季為呼吸道疾病發(fā)病的高峰期,并且在一些擁擠的環(huán)境中如療養(yǎng)院、監(jiān)獄、巡航的艦船以及新兵營等更易暴發(fā)感染。肺炎支原體感染不只是表現(xiàn)為呼吸道感染,也可表現(xiàn)為全身多器官損傷綜合征,國內(nèi)外文獻(xiàn)頻繁報(bào)道肺炎支原體感染引起皮膚、神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、血液系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)等重要臟器的嚴(yán)重

3、并發(fā)癥。社區(qū)獲得性肺炎的暴發(fā)流行不僅與環(huán)境因素有關(guān),更重要的是缺乏有效的早期診斷手段。而在疫情的早期要鑒別病毒抑或支原體感染亦較困難。針對(duì)近來我省某些院校多次出現(xiàn)不明原因疫情爆發(fā)的現(xiàn)狀,本實(shí)驗(yàn)中選取其中幾種常見和新型病原體建立早期、特異且快速的實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time polymerase chain reaction,實(shí)時(shí)熒光定量PCR)法,并聯(lián)合血清學(xué)檢測(cè)法和高通量擴(kuò)增測(cè)序法來明確疫情的病因,同時(shí)用于此后疫情的監(jiān)

4、測(cè)。
   目的:建立能特異、快速且有效地檢測(cè)5種病原體感染的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,并從血清學(xué)和基因水平探究一起青年學(xué)員急性傳染性肺炎暴發(fā)的病因。
   研究對(duì)象與方法:2007年12月-2008年1月期間某學(xué)院爆發(fā)了一起不明原因發(fā)熱疫情,其中71例在我科住院治療,我們?cè)诔薪右咔樵\療時(shí)及時(shí)收集到71例患者的急性期和恢復(fù)期血清各一份;采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme linked immunosorbent assay

5、,ELISA)法檢測(cè)血清中的抗常見呼吸道病原體抗體;用已知的5種病原體標(biāo)準(zhǔn)株通過克隆后得到標(biāo)準(zhǔn)曲線,即建成可以用于臨床標(biāo)本的相應(yīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法。提取血清樣本中的DNA/RNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)病原體核酸;并用普通聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)法隨機(jī)擴(kuò)增病原體核酸后采用非選擇性高通量擴(kuò)增測(cè)序法直接查找病原體核酸,將擴(kuò)增產(chǎn)物通過Solexa分析系統(tǒng)直接測(cè)序分析。
   結(jié)

6、果:在71例患者的急性期和恢復(fù)期血清中檢測(cè)到抗肺炎支原體IgM和/或IgG陽性能診斷肺炎支原體感染者16例(22.5%);實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)甲、乙型流感病毒、嗜肺軍團(tuán)菌和支原體核酸均陰性;在非選擇性擴(kuò)增出的582750條帶中,未見特征病毒序列出現(xiàn);與限定物種數(shù)據(jù)庫比對(duì),不存在人流感病毒 A型/B型、嗜肺軍團(tuán)菌、肺炎支原體和鼻病毒等呼吸道相關(guān)病原體的基因片段。
   本實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論:1)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)肺炎支原體的現(xiàn)癥感

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