茶多酚對(duì)MPTP-PD小鼠模型神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:在帕金森病(Parkinson,PD)小鼠模型基礎(chǔ)上,探討茶多酚(TeaPolyphenols,TP)對(duì)1-甲基-4-苯基-1-2-3-6-四氫吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致小鼠PD模型的多巴胺神經(jīng)元的保護(hù)作用及其作用機(jī)制,以期揭示茶多酚保護(hù)PD的作用途徑,為茶多酚應(yīng)用PD的臨床提供更多的理論依據(jù)。
　　 方法:選擇69只C57BL雄性小鼠(20-

2、25g)(由上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)清潔級(jí)自由攝水和食物,12小時(shí)明暗環(huán)境適應(yīng)一周后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。C57BL/6小鼠69只隨機(jī)分為8組,①生理水組(對(duì)照組)為生理鹽水(NS)+生理鹽水(NS),②茶多酚組(TP組)為NS+茶多酚(TP),其中TP組又分為TP1組(10mg/kg)、TP2組(30mg/kg)、TP3組(60mg/kg),③PD組(模型組)為Ns+MPTP,④茶多酚保護(hù)組(保護(hù)組)為TP+PD組,其中TP+PD組又分為TP+

3、PD1組(10mg/kg)、TP+PD2組(30mg/kg)、TP+PD3組(60mg/kg)。在造模前對(duì)各組進(jìn)行爬桿時(shí)間及游泳試驗(yàn)評(píng)分的測(cè)定。①NS組:腹腔注射生理鹽水②TP組:腹腔注射不同劑量TP(TP1,TP2,TP3),首先每隔2小時(shí),共3次,其后,每隔5小時(shí)注射,共2次③PD組:腹腔注射MPTP(20mg/kg),每隔2小時(shí),共3次④TP+PD組:先注射TP(TP+PD1,TP+PD2,TP+PD3),半小時(shí)后注射MPTP,參

4、照PD組完成MPTP的注射。TP的注射時(shí)間表參照TP組。造模72小時(shí)后測(cè)定各組小鼠爬桿時(shí)間及游泳試驗(yàn)評(píng)分。于造模7天后斷頭,取腦,中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元的免疫組化測(cè)定,雙側(cè)紋狀體的細(xì)胞因子IL-6、TNF-α因子的測(cè)定。
　　 結(jié)果:
　　 1.行為學(xué)的測(cè)定
　　 ①爬桿時(shí)間測(cè)定
　　 PD組造模后爬桿的時(shí)間與造模前比較明顯延長(zhǎng)(P<0.05)；TP+PD1組、TP+PD3組造模后與造模前比較爬桿時(shí)間明顯延

5、長(zhǎng)(P<0.05)；而TP+PD2組造模后與造模前比較爬桿時(shí)間無明顯變化；TP+PD1、TP+PD3組的爬桿時(shí)間較TP+PD2組明顯延長(zhǎng)(P<0.05)。
　　 ②游泳試驗(yàn)評(píng)分測(cè)定
　　 PD組造模后游泳試驗(yàn)評(píng)分與造模前比較明顯降低,統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在顯著差異(P<0.05)；NS組、TP組造模前后游泳試驗(yàn)評(píng)分無明顯差異,TP+PD1組、TP+PD2組、TP+PD3組造模后與造模前比較游泳試驗(yàn)評(píng)分均明顯降低(P<0.05)；造

6、模后PD組與NS組、TP組有明顯差異(P<0.05),PD組較TP+PD1、TP+PD3組、TP+PD2組造模后游泳試驗(yàn)評(píng)分無明顯差異(P>0.05)。TP+PD1、TP+PD3組與TP+PD2組比較無明顯差異(P>0.05)。
　　 2.TH的免疫組化染色
　　 TH染色顯示PD組較NS組黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元明顯減少(P<0.05)；經(jīng)TP預(yù)處理后的TP保護(hù)組多巴胺神經(jīng)元數(shù)目明顯增加,TP+PD1組、TP+PD2組、TP+

7、PD3組與PD組比較神經(jīng)元數(shù)目明顯增多(P<0.05),TP+PD2組多巴胺神經(jīng)元數(shù)目較TP十PD1、TP+PD3組明顯增多(P<0.05)。NS組、TP組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)無明顯差異(P>0.05)。
　　 3.紋狀體細(xì)胞因子的測(cè)定
　　 ①IL-6的測(cè)定
　　 與NS組、TP組相比,PD組小鼠紋狀體內(nèi)IL-6含量明顯降低(P<0.05)。NS組與TP+PD組小鼠紋狀體內(nèi)IL-6含量無明顯差異(P>0.05)；TP+P

8、D1、TP+PD2和TP+PD3組小鼠紋狀體內(nèi)IL-6含量較PD組明顯升高(P<0.05)；而TP+PD1、TP+PD2組與TP+PD3組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TP+PD3組小鼠紋狀體內(nèi)IL-6含量較TP+PD1和TP+PD2組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 ②TNF-α的測(cè)定
　　 Ns組和TP+PD組小鼠紋狀體內(nèi)TNF-α含量與PD組比較,無顯著差異(P>0.05),PD組小鼠紋狀體內(nèi)

9、的TNF-α含量與TP+PD1、TP+PD2和TP+PD3組比較亦無顯著性差異(P>0.05),TP+PD1、TP十PD2組紋狀體區(qū)的TNF-α含量與TP+PD3組比較亦無顯著性差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.通過腹腔注射MPTP成功復(fù)制PD小鼠模型。茶多酚能改善PD模型小鼠的行為學(xué)
　　 2.PD模型小鼠黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元數(shù)目較正常小鼠明顯減少,經(jīng)茶多酚干預(yù)的PD模型小鼠黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元數(shù)目明顯增