肝臟缺血再灌注損傷對胰島素信號轉導上游通路的影響及丙泊酚的干預作用.pdf

1、第一部分肝臟缺血再灌注損傷對胰島素信號轉導游通路的影響 目的：L研究大鼠肝臟缺血再灌注損傷(HIRI)胰島素信號轉導過程中上游通路信號蛋白表達的改變。 方法： 選用健康SD大鼠80只，隨機分為缺血再灌注組(I/R組)和對照組(C組)，每組40只。I/R組建立HIRI大鼠模型(肝門阻斷30 min后再灌注2 h)，C組除未行肝門阻斷外，其余操作同I/R組。分別測定肝門阻斷前(T1)及肝門阻斷30 min再灌注2 h

2、(T2)血糖(BG)、血清胰島素(Ins)濃度，并計算胰島素分泌指數(ISI)及胰島素抵抗指數(HOMA-IR)。于T2時點采用Western blot法檢測兩組大鼠肝組織胰島素受體β亞單位(IR β)、胰島素受體底物2(IRS-2)、磷酸肌醇3激酶(P13K)的p85亞基(p85)等胰島素信號蛋白及使用免疫沉淀法檢測IR β、IRS-2酪氨酸磷酸化蛋白表達及IRS-2與P13K相互作用的改變；同時檢測兩組大鼠骨骼肌IR β、胰島素受體

3、底物1(IRS-1)、p85等胰島素信號蛋白及IR β、IRS-1酪氨酸磷酸化蛋白表達及IRS-1與P13K的相互作用的改變。 結果： 與T1比較，兩組T2時BG均明顯升高(P<0.01)；但I/R組T2時BG升高比C組更為明顯(P<0.01)。與T1比較，I/R組T2點Ins無明顯變化；C組T2時Ins濃度明顯高于I/R組（P<0.05)。與T1比較，I/R組T2點ISI值明顯降低(P<0.01)。與T1比較，兩組在T

4、2時HOMA-IR明顯升高(P<0.01)。兩組大鼠T2點肝組織IR β、IRS-2和p85表達量均無明顯差異(P>0.05)；兩組大鼠T2點骨骼肌IR β、IRS-1和p85表達量均無明顯差異(P>0.05)。與C組比較，UR組肝組織在T2時IRβ、IRS-2酪氨酸磷酸化蛋白表達量及IRS-2與P13K的相互作用分別減少了32.2％(P<0.01)、47.7％(P<0.01)和55.6％(P<0.01)；骨骼肌組織IR β、IRS-1

5、酪氨酸磷酸化蛋白表達量及IRS-1與P13K的相互作用在T2時分別比C組減少了79％9P<0.01)、49％(P<0.01)和38％(P<0.01)。 結論： HIRI導致了胰島素分泌障礙，同時降低了肝臟和骨骼肌組織胰島素信號轉導通路中信號分子IR β、IRS的酪氨酸磷酸化以及IRS與P13K的相互作用，從而干擾葡萄糖的代謝過程，這可能是HIRI后血糖升高的原因之一。 第二部分丙泊酚對肝臟缺血再灌注損傷致胰島素信

6、號轉導上游通路改變的干預作用 目的:研究丙泊酚對大鼠肝臟缺血再灌注損傷(刪)致胰島素信號轉導上游通路改變的影響。 方法： 選用健康SD大鼠80只，隨機分為丙泊酚組(P組)和缺血再灌注組(I/R組)，每組40只。建立HIRI大鼠模型(肝門阻斷30 min后再灌注2 h)，P組從肝門阻斷前20 min以10 mg·kg-1·h-1注入丙泊酚直至再灌注2 h結束，I/R組則等速注入等量生理鹽水。分別測定肝門阻斷前(T1

7、)及肝門阻斷30 min再灌注2 h(T2)的血糖(BG)、血清胰島素(Ins)的濃度，并計算胰島素分泌指數(ISI)及胰島素抵抗指數(HOMA-IR)。于T2時點采用Western blot法檢測檢測兩組大鼠肝組織胰島素受體β亞單位(IR β)、胰島素受體底物2(IRS-2)、磷酸肌醇3激酶(P13K)的p85亞基(p85)等胰島素信號蛋白量及使用免疫沉淀法檢測IR β、IRS-2酪氨酸磷酸化蛋白表達量及IRS-2與P13K相互作用的

8、改變；同時檢測兩組大鼠骨骼肌IR β、胰島素受體底物1(IRS-1)、p85等胰島素信號蛋白及IR β、IRS.1酪氨酸磷酸化蛋白表達量及IRS-1與P13K的相互作用的改變。 結果： 與T1比較，兩組T2時BG水平均明顯升高(P<0.01)；I/R組T1時BG水平與P組無明顯差異(p>0.05)，但T2時明顯升高(P<0.05)。與T1比較，兩組在T2時血清Ins無明顯變化(p>0.05)；I/R組T2時血清Ins水平

9、與P組無明顯差異(p>0.05)；但T2時111s水平明顯降低(P<0.05)。與T1比較，兩組T2時ISI值均明顯降低(P<0.01)；I/R組T1時ISI值與P組無明顯差異(p>0.05)，但T2時ISI明顯降低(P<0.01)。與Tl比較，兩組T2時HOMA-IR值明顯升高(P<0.01)；I/R組與P組相同時點比較，T1和T2時均無明顯差異(p>0.05)。兩組大鼠肝臟組織中IR β、IRS-2和p85亞基蛋白表達量均無明顯差異

10、。與P組比較，I/R組T2時肝臟組織中Tyr-IR β和Tyr-IRS2表達量分別減少了22.8％(P<0.01)和24.1％(P<0.01)，IRS-2與P13K的相互作用減少了23.9％(P<0.01)。兩組大鼠骨骼肌組織中IR β、IRS-1和p85亞基蛋白表達量無明顯差異。與P組比較，I/R組T2時點骨骼肌組織中Tyr-IR β和Tyr-IRSl表達量分別減少了34.9％(P<0.01)和24.2％(P<0.01)，IRS-1與