茶樹(shù)CBF1基因的表達(dá)特性及對(duì)大腸桿菌耐凍性和耐直性的影響.pdf

1、ExpressioncharacteristicsofCamelliasinensisCBFlgeneandInfluenceoncoldresistanceandsalttoleranceofEScherichiaCoilenctuaCOltEs’’、’。submittedt01laeSlSsUDmlttetoOjngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementforth

2、eDegreeofMasterofAgronomyGuoXiuli(DepartmentofHorticulture)Supervisor：DingZhao—tangQingdaoChinaJune，2013青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文摘要摘要茶樹(shù)(Camelliasinensis(L)OKuntze)具有喜溫畏寒的特性。低溫凍害在我國(guó)茶樹(shù)生產(chǎn)中常見(jiàn)易發(fā)，嚴(yán)重影響茶葉的產(chǎn)量和品質(zhì)。因此，茶樹(shù)抗寒機(jī)理的研究對(duì)于提高茶樹(shù)抗寒性和茶樹(shù)品種資源的利用具

3、有十分重要的意義。CBF(Crepeat—bindingfactor)是一類與低溫脅迫相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，它能夠與COR基因啟動(dòng)子中的CRT／DRE元件特異地結(jié)合，激活COR基因的表達(dá)，從而提高植物的抗寒性。CBF類轉(zhuǎn)錄因子能夠綜合地改良植物的抗寒性狀，是目前比較理想的植物抗逆工程基因。因此，克隆茶樹(shù)CBFl基因，并對(duì)其進(jìn)行表達(dá)和功能研究，對(duì)于了解CBFl基因在茶樹(shù)抗寒分子機(jī)理中的作用具有重要意義。本研究在克隆茶樹(shù)CBFl基因(o∞FJ『)

4、的基礎(chǔ)上，較全面的闡明了CsCBFl的表達(dá)調(diào)控特性；構(gòu)建了CsCBFl的原核表達(dá)載體，研究CsCBFl在大腸桿菌中的作用；構(gòu)建了CsCBFI的植物雙元表達(dá)載體，為進(jìn)一步揭示該基因的功能和表達(dá)調(diào)控奠定了理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：1在克隆CsCBFl基因的基礎(chǔ)上，利用qRTPCR方法分析CsCBFl基因在低溫(4℃、5℃)、干旱和ABA處理下的表達(dá)特性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CsCBFl基因在常溫下幾乎不表達(dá)，但受到低溫(4“C)誘導(dǎo)后會(huì)大量表達(dá)，且表

5、達(dá)較為持久，5℃低溫對(duì)CsCBFl基因的表達(dá)有下調(diào)作用；常溫下噴施ABA能誘導(dǎo)CsCBFl基因的表達(dá)，但4“C下噴施ABA卻抑制了CsCBFl基因的表達(dá)；噴施PEG6000會(huì)對(duì)CsCBFl基因的表達(dá)有微弱的上調(diào)作用：2對(duì)CsCBFl基因進(jìn)行了密碼子使用特性分析。發(fā)現(xiàn)CsCBFl基因偏好使用以G／C結(jié)尾的密碼子，與單子葉植物(小麥、玉米)的密碼子偏好性差異大于與同為雙子葉植物(擬南芥、煙草)的密碼子偏好性差異。因此擬南芥和煙草更適合作為C

6、sCBFl基因的外源表達(dá)系統(tǒng)。3構(gòu)建原核表達(dá)載體pET32a()CsCBFl，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，通過(guò)測(cè)定低溫(4“C、20。C)和高鹽(3％NaCl)條件下CsCBFI宿主菌的生存能力，發(fā)現(xiàn)CsCBFl蛋白能提高宿主茵的存活率，可能是CsCBFl對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用。4成功構(gòu)建了表達(dá)載體pBll21CsCBFl，用花絮侵柒法將其轉(zhuǎn)入擬南芥，轉(zhuǎn)基因植株的篩選工作正在進(jìn)行中，為進(jìn)一步研究CsCBFl基因在植物體內(nèi)的調(diào)控模式以及該基因在植