擬南芥轉(zhuǎn)錄因子CBF1及NAC基因的克隆與原核表達(dá).pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子(transcription factor，TF)是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達(dá)功能的蛋白質(zhì)，又稱反式作用因子。通過識(shí)別與結(jié)合真核基因啟動(dòng)子中的順式作用元件，使目的基因的表達(dá)得到精準(zhǔn)的調(diào)控。擬南芥在植物結(jié)構(gòu)功能、進(jìn)化遺傳及生態(tài)學(xué)領(lǐng)域的研究被廣泛使用，是大家廣為熟悉的植物遺傳學(xué)研究中的模式生物。擬南芥模式植物的優(yōu)點(diǎn)是其功能基因較容易獲得。在植物功能基因的研究中，常常需要實(shí)現(xiàn)目的基因以特定的強(qiáng)度、在特定的時(shí)間和空間表達(dá)的效果，

2、而這正是因?yàn)檗D(zhuǎn)錄因子在這過程中所起的作用。CBF1和 NAC是兩種重要的激活植物抗逆基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。擬南芥CBF1轉(zhuǎn)錄因子能調(diào)控一組抗干旱和抗低溫基因的表達(dá)，從而有效提高植物體對(duì)干旱和低溫的抗性能力；擬南芥NAC主要參與調(diào)控植物低溫、干旱、激素、高鹽、生長(zhǎng)發(fā)育及病原脅迫反應(yīng)等相關(guān)過程。
　　本研究以擬南芥(Arabidopsis thaliana)葉片為研究材料，通過基因克隆和表達(dá)的方法初步研究了植物轉(zhuǎn)錄因子CBF1和NAC的

3、功能，為后續(xù)植物抗逆性能改良打好基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)首先用Trizol試劑法提取總RNA，經(jīng)RT-PCR反轉(zhuǎn)錄，之后擴(kuò)增CBF1基因和NAC基因；接著對(duì)目的基因進(jìn)行克隆篩選，并通過酶切和測(cè)序進(jìn)行鑒定，最后分析序列并利用軟件 DNAMAN翻譯相應(yīng)蛋白質(zhì)，預(yù)測(cè)了蛋白質(zhì)的水親和性；最后利用克隆獲得的CBF1基因構(gòu)建原核表達(dá)載體，通過誘導(dǎo)表達(dá)獲取蛋白差異表達(dá)譜。SDS-PAGE結(jié)果表明 CBF1基因表達(dá)產(chǎn)物大小為24 kD。本研究獲得的初步結(jié)果為植物的抗