禽源大腸桿菌耐酶抑制劑β-內(nèi)酰胺酶(IRBLs)的基因型檢測(cè).pdf

1、本課題旨在對(duì)收集到的禽源大腸桿菌進(jìn)行耐酶抑制劑β-內(nèi)酰胺酶(IRBLs)的檢測(cè)和耐藥性分析，來(lái)了解在國(guó)內(nèi)禽源大腸桿菌中產(chǎn)IRBLs的類型、分布情況以及對(duì)抗菌藥物的耐藥情況，并通過(guò)檢測(cè)其基因型，來(lái)探討大腸桿菌的耐藥特點(diǎn)和機(jī)制，從而為獸醫(yī)臨床合理用藥、減少耐藥的發(fā)生及控制耐藥基因的傳播提供理論依據(jù)。2008年5月-2009年12月，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)從河南各地采集的病料進(jìn)行分離純化，選擇VITEK-32全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀鑒定為大腸桿菌的135株菌株作

2、為受試菌株，采用紙片擴(kuò)散法（K-B法）測(cè)定阿莫西林、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、替卡西林、替卡西林/克拉維酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢噻吩、頭孢唑啉、頭孢西丁等的抑菌圈直徑，對(duì)符合耐酶抑制劑β-內(nèi)酰胺酶耐藥表型的菌株用微量二倍稀釋法測(cè)定其對(duì)不同抗菌藥物及抗菌藥物聯(lián)合的最小抑菌濃度(MIC)，并用針對(duì)其基因的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增全序列，將PCR產(chǎn)物測(cè)序，使用Blast軟件在Genbank中檢索比較。耐酶抑制劑T

3、EM型β-內(nèi)酰胺酶基因的引物為：IRTU:5’-ATGAGTATTCAACATTTCCG-3’，IRTL:5’-CTGACAGTTACCAATGCTTA-3’。
　　 結(jié)果表明，K-B紙片法共篩選出對(duì)阿莫西林/克拉維酸，氨芐西林/舒巴坦耐藥、頭孢唑啉敏感的菌株20株，微量肉湯稀釋法測(cè)定他們對(duì)不同抗菌藥物的耐藥情況分別為：對(duì)阿莫西林、氨芐西林及其與酶抑制劑聯(lián)合的復(fù)方制劑耐藥，這與K-B法結(jié)果一致。哌拉西林的耐藥率較低，為55％，其

4、與三唑巴坦的復(fù)方藥物的耐藥率僅為20％。對(duì)氟苯尼考、慶大霉素、新霉素耐藥率高達(dá)100％，對(duì)多西環(huán)素的耐藥率為95％。對(duì)頭孢吡肟、阿米卡星、磷霉素、亞胺培南/西司他丁、黏菌素敏感，敏感率為100％。對(duì)左氧氟沙星和頭孢曲松的敏感率為75％，對(duì)環(huán)丙沙星的敏感率為65％，對(duì)頭孢噻肟的敏感率為90％。PCR擴(kuò)增結(jié)果為15株擴(kuò)增出IRT全序列，PCR產(chǎn)物經(jīng)純化、克隆后測(cè)序，對(duì)序列結(jié)果分析表明，14株的PCR產(chǎn)物的核苷酸序列編碼的蛋白質(zhì)與TEM-11