線粒體融合素基因2突變體誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討線粒體融合素基因2（mitofusin 2，Mfn 2）蛋白激酶A（PKA）磷酸化位點(diǎn)突變后對(duì)血管平滑肌細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法:分別以攜帶全長(zhǎng)Mfn2基因的重組腺病毒（Adv-Mfn2）、攜帶不同Mfn2基因PKA磷酸化位點(diǎn)突變體的重組腺病毒（Adv-Mfn2-S442A，Adv-Mfn2-S442D）和僅含有半乳糖苷酶基因的對(duì)照腺病毒（Adv-LacZ）感染大鼠血管平滑肌細(xì)胞，原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情

2、況。構(gòu)建大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型，分別用上述重組腺病毒感染損傷的頸總動(dòng)脈段，以注射磷酸鹽緩沖液（PBS）作為未感染對(duì)照組，同時(shí)以假手術(shù)組作為正常對(duì)照組，分別于術(shù)后5、14天取材，應(yīng)用免疫組化檢測(cè)外源基因的表達(dá)，原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法檢測(cè)凋亡細(xì)胞、HE染色行組織形態(tài)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：重組腺病毒感染大鼠血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）60h后，Adv-Mfn2組和Adv-Mfn2-S442A組血管平滑肌細(xì)胞明顯凋亡，而Control組、A

3、dv-LacZ組和Adv-Mfn2-S442D組血管平滑肌細(xì)胞無(wú)明顯凋亡。大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷術(shù)后5天，免疫組化證實(shí)Adv-Mfn2、Adv-Mfn2-S442A、Adv-Mfn2-S442D三組Mfn2蛋白表達(dá)水平明顯增加，TUNEL染色顯示Adv-Mfn2、Adv-Mfn2-S442A組凋亡細(xì)胞數(shù)較Control組、Adv-LacZ組和Adv-Mfn2-S442D組明顯增加（P＜0.01）；與Adv-Mfn2組相比，Adv-Mfn2-

4、S442A組凋亡細(xì)胞數(shù)更多（P＜0.01）。術(shù)后14天，HE染色顯示Adv-Mfn2組、Adv-Mfn2-S442A組內(nèi)膜/中膜面積比明顯低于Control組、Adv-LacZ組和Adv-Mfn2-S442D組（P<0.01）；且Adv-Mfn2-S442A組內(nèi)膜/中膜面積比值較Adv-Mfn2組更低（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：（1）高表達(dá)Mfn2基因可促進(jìn)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后血管平滑肌細(xì)胞凋亡；（2）Mfn2-S442A促