靶向AKT通路的非編碼RNA聯(lián)合化療抑制乳癌細(xì)胞生長的研究.pdf

1、AKT通路調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。阻斷該通路的高活性,將有可能提高腫瘤治療的效果。本課題將應(yīng)用靶向AKT通路的非編碼RNA技術(shù)聯(lián)合化療,研究其對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的體外抑制作用。
　　 應(yīng)用靶向P13Kp85a的siRNA敲低在MCF-7細(xì)胞中的表達(dá)。MTT結(jié)果顯示P13Kp85α siRNA組細(xì)胞生長速度明顯小于對照組和空載體轉(zhuǎn)染組;流式細(xì)胞術(shù)表明細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期,凋亡比例顯著提高。免

2、疫熒光及Western blot結(jié)果均顯示PI3Kp85α、p-AKT、AKT-2、Ki67和Bcl-2蛋白表達(dá)的強(qiáng)度均減弱。
　　 Oligofectamine轉(zhuǎn)染靶向AKT1的siRNA至MCF-7細(xì)胞,RT-PCR結(jié)果表明AKT1 siRNA組可以有效敲低AKT1的表達(dá)水平;MTT結(jié)果顯示AKT1 siRNA組細(xì)胞增殖率顯著降低:流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞在G0/G1期阻滯,凋亡比例明顯高于對照組與空載體轉(zhuǎn)染組;免疫熒光和west

3、ern blot結(jié)果均表明AKT、p-AKT、Ki67、Bcl-2幾個(gè)重要癌蛋白的表達(dá)水平均有明顯的下調(diào)。
　　 重組腺病毒質(zhì)粒表達(dá)載體rAd5-siAKT1-siPI3K介導(dǎo)的靶向AKT1,PI3KP85亞基的shRNA可以有效敲低AKT1、PI3Kp85表達(dá)水平。下游相關(guān)因子PCNA、CyclinD1表達(dá)下調(diào),P53表達(dá)則上調(diào)。MTT法分析顯示rAd5-siAKT1-siPI3K轉(zhuǎn)染組胞生長抑制率＞50％,流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果

4、顯示出現(xiàn)G0/G1細(xì)胞周期阻滯。2-Dmatrigel基質(zhì)生長實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞貼壁生長能力明顯減低,3-Dmatrigel基質(zhì)生長實(shí)驗(yàn)顯示rAd5-siAKT1-siPI3K轉(zhuǎn)染組細(xì)胞形成的細(xì)胞團(tuán)塊較小。
　　 探討以PAMAM為載體介導(dǎo)。miR-21抑制劑聯(lián)合紫杉醇的抑瘤作用。聯(lián)合治療組細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(IC50)從600nmo/L降低到80nmo/L;MTT結(jié)果表明聯(lián)合治療組細(xì)胞增殖率顯著降低,流式細(xì)胞儀表明細(xì)胞凋亡比例顯著升高