哮喘大鼠血清對嗜鉻細胞結構和功能的影響及補腎方的干預作用.pdf

1、目的：觀察哮喘大鼠血清對大鼠嗜鉻細胞結構和功能的影響，并通過補腎方血清對正常嗜鉻細胞的干預，初步了解“從腎論治哮喘”的可能途徑。
　　 方法：32只Sprague-Dawley(SD)大鼠按隨機數(shù)字表法分為四組：對照組(CG)、哮喘組(ASG)、地塞米松組(DXMG)、補腎方組(KTSG)，除對照組外，其余三組均以OVA、滅活百日咳桿菌及氫氧化鋁致敏，之后四組均予以OVA霧化激發(fā)。14天后處死各組大鼠，取血清備用。另以SD大鼠提

2、取正常原代腎上腺嗜鉻細胞，待細胞活性穩(wěn)定后分為四組：對照血清干預組(CSG)、哮喘血清干預組(ASSG)、地塞米松血清干預組(DXMSG)、補腎方血清干預組(KTSG)，每組均分別以動物實驗所提取血清干預細胞72h，分別提取細胞及培養(yǎng)液上清。ELISA法檢測培養(yǎng)液上清中腎上腺素含量(EPI)；電鏡觀測各組細胞超微結構；RT-PCR檢測細胞中Rho GDIα及Peripherin mRNA表達水平；免疫細胞化學技術檢測RhoGDIα及Pe

3、dpherin蛋白表達水平。
　　 結果：各組細胞培養(yǎng)液上清中，哮喘血清干預組腎上腺素含量明顯低于正常血清干預組(16.02±3.08 vs24.65±3.52pg/ml，P<0.05)；補腎方血清干預組(20.52±1.97pg/ml)及地塞米松血清干預組(20.54±2.41pg/ml)腎上腺素含量明顯高于哮喘血清干預組(P<0.05)。細胞電鏡顯示哮喘血清干預組嗜鉻細胞結構紊亂，分泌囊泡脫落，伸出大量突觸；與之相比，補腎方

4、血清干預組與地塞米松血清干預組嗜鉻細胞結構保存較完整，突觸樣細胞突起伸出不明顯，分泌囊泡形態(tài)良好。細胞RT-PCR分析顯示與對照血清干預組相比，哮喘血清干預組Rho GDIα mRNA表達明顯減弱(P<0.05)，而Peripherin mRNA表達則明顯增強(P<0.05)。細胞免疫化學結果同樣證實，哮喘血清干預組Rho GDIα熒光強度明顯弱于正常血清干預組；Peripherin熒光表達則明顯強于正常血清干預組。與哮喘血清干預組相比

5、，補腎方血清干預組及地塞米松血清干預組Rho GDIα mRNA表達明顯強于哮喘血清干預組(P<0.05)，Peripherin mRNA表達弱于哮喘血清干預組(P<0.05)；補腎血清干預組及地塞米松血清干預組Rho GDIα熒光表達均明顯高于哮喘血清干預組；Peripherin熒光表達則明顯弱于哮喘血清干預組；
　　 結論：⑴哮喘大鼠血清可對嗜鉻細胞結構和內分泌功能產(chǎn)生影響；⑵補腎方可保護腎上腺嗜鉻細胞的結構和功能，抑制其向