芍藥花乙烯代謝及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)主要基因的克隆與分析.pdf

1、芍藥是中國(guó)的傳統(tǒng)名花，適宜做切花應(yīng)用。由于芍藥花期短且集中，影響了它的應(yīng)用價(jià)值。乙烯在芍藥花開(kāi)放和衰老進(jìn)程中具有關(guān)鍵的調(diào)控作用。本論文應(yīng)用RT-PCR技術(shù)，克隆了芍藥肌動(dòng)蛋白和ACC氧化酶的編碼區(qū)序列；應(yīng)用RACE技術(shù)克隆了芍藥ACC合成酶、乙烯受體ETR1及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)關(guān)鍵元件EIN3基因cDNA序列，并對(duì)他們進(jìn)行了初步的生物學(xué)信息分析；應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù)分析了Actin基因在不同組織和芍藥切花不同發(fā)育階段的表達(dá)情況。研究結(jié)果如下

2、：
　　1、克隆了芍藥Actin編碼區(qū)序列，GenBank登錄號(hào)為JX310002。該基因長(zhǎng)度為1134 bp，共編碼377個(gè)氨基酸。芍藥肌動(dòng)蛋白與棉花、向日葵、白梨等物種肌動(dòng)蛋白氨基酸同源性達(dá)99％；生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)分子量為41.7 kD，等電點(diǎn)（pI）為5.31，是一個(gè)定位于胞液、不含跨膜域、不含信號(hào)肽分子的親水的、穩(wěn)定蛋白。半定量RT-PCR技術(shù)分析表明Actin基因在芍藥根、莖、葉、花及芍藥切花不同發(fā)育階段中的表達(dá)量保持

3、恒定，適宜作為芍藥功能基因表達(dá)分析的內(nèi)標(biāo)基因。
　　2、克隆了芍藥ACO基因編碼區(qū)序列，GenBank登錄號(hào)為JX445143。該基因長(zhǎng)度為939 bp，編碼312氨基酸，預(yù)測(cè)ACO基因分子量為35.2 kD，等電點(diǎn)（pI）為5.24。生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)芍藥ACO蛋白沒(méi)有信號(hào)肽，屬于非分泌蛋白，可能沒(méi)有跨膜蛋白，亞細(xì)胞定位在細(xì)胞質(zhì)。與牡丹、獼猴桃、棗、巴西橡膠等植物ACO蛋白的同源性均超過(guò)80%。
　　3、基于RACE技術(shù)獲

4、得了芍藥ACS基因cDNA全長(zhǎng)序列，GenBank登錄號(hào)為JX512359。該基因長(zhǎng)度為1752 bp，編碼492個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量為55.2 kD，等電點(diǎn)（pI）為7.13，生物信息學(xué)分析表明芍藥ACS蛋白沒(méi)有信號(hào)肽，屬于非分泌蛋白，亞細(xì)胞定位在細(xì)胞質(zhì)，與牡丹、枇杷、蘋(píng)果、天竺葵等物種ACS蛋白的同源性均高于70%。
　　4、基于RACE技術(shù)克隆了芍藥ETR1基因cDNA全長(zhǎng)序列，GenBank登錄號(hào)為JX406435。該基因

5、長(zhǎng)度為2817 bp，編碼740個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量為83.1 kD，等電點(diǎn)（pI）為6.82，生物信息學(xué)軟件分析它是一個(gè)定位于液泡，沒(méi)有信號(hào)肽。與橙子、枇杷、番茄、萵苣等物種蛋白的同源性均超過(guò)80%。
　　5、基于RACE技術(shù)獲得了芍藥EIN3基因cDNA全長(zhǎng)序列，GenBank登錄號(hào)為JX445144。該基因長(zhǎng)度為2739 bp，編碼548個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)分子量為61.5 kD，等電點(diǎn)（pI）為5.55，生物信息學(xué)軟件分析 EI