番茄乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)組分EIN3互作蛋白LeEBFs的基因克隆和功能研究.pdf

1、乙烯作為植物激素，在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。乙烯對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程的影響包括：種子萌發(fā)、對(duì)莖和根伸長(zhǎng)的抑制、開(kāi)花、衰老和脫落、性別分化、果實(shí)成熟、脅迫反應(yīng)等。目前，乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及其調(diào)控機(jī)理已成為植物分子生物學(xué)的研究熱點(diǎn)。Potuschak和Guo等同時(shí)在擬南芥中發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)能與 EIN3相互作用的F結(jié)構(gòu)域蛋白，EBF1和EBF2蛋白（EIN3-binding F- box protein）。EBF1的過(guò)量表達(dá)使植物對(duì)乙烯

2、不敏感。相反，帶有EBF1和EBF2雙突變體的efb1/efb2植株在沒(méi)有乙烯的情況下卻能產(chǎn)生乙烯組成性的反應(yīng)，并有EIN3蛋白的積累，表明乙烯反應(yīng)依賴于EIN3蛋白的穩(wěn)定性。乙烯可以快速提高擬南芥EIN3蛋白水平，在沒(méi)有乙烯存在的情況下，EIN3蛋白可以迅速通過(guò)EBF1和EBF2所介導(dǎo)的ubiquitin/proteasome途徑而降解。這表明ubiquitin/proteasome途徑通過(guò)降解 EIN3蛋白而淬滅乙烯信號(hào)，從而表現(xiàn)出

3、對(duì)乙烯信號(hào)的負(fù)調(diào)節(jié)，所以對(duì)EIN3蛋白的調(diào)控是乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)鍵步驟。對(duì)番茄LeEBF1和LeEBF2基因的研究，將使我們對(duì)番茄乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、果實(shí)成熟及環(huán)境脅迫中防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)基因調(diào)控的機(jī)理更加明確，為利用基因工程技術(shù)改良番茄等作物提供理論依據(jù)。本研究主要取得了以下結(jié)果：
　?、偻ㄟ^(guò)RACE和RT-PCR方法從番茄中克隆得到LeEBF1和LeEBF2的全長(zhǎng)cDNA序列，其長(zhǎng)度分別是2866和2891 bp。序列分析表明，它們的開(kāi)

4、放閱讀框分別是1911和1995bp，分別編碼637和665個(gè)氨基酸殘基，在氨基端含保守的F-box區(qū)域，在羧基端有14個(gè)亮氨酸重復(fù)單位。通過(guò) BLAST軟件和DNAMAN分析表明這兩個(gè)基因的氨基酸序列同源性高達(dá)58.6％，同時(shí)與其他物種EBF蛋白的F-box區(qū)域同源性達(dá)24.4％-73.2％。由此我們推論LeEBF1和LeEBF2可能屬于EBF蛋白家族。
　?、?Northern雜交結(jié)果表明：LeEBF1與 LeEBF2在野生型