黃瓜cucumissativusl.性別相關(guān)基因ein3和acs1g基因多態(tài)性研究

1、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文黃瓜（Cucumis sativus L.）性別相關(guān)基因EIN3和ACS1G基因多態(tài)性研究姓名：許亮申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：盧向陽;易克20050601腳 庫農(nóng)企才筍硬f老 2 0 0 5 牽 6 刀譜整合以 及黃瓜品種改良 創(chuàng)造條件?！?方法】根據(jù)國內(nèi) 外報道的 擬南芥、 煙草和甜瓜E I N 3 與E I L 基因m R N A 的 保守序列進行分析，利用 D N A M A N

2、 5 . 2 . 2軟件進行同 源性比 對后，用 P r i m e r P r e m i e r 5 . 0和 O l i g o 6軟件設(shè)計引物，克隆測序獲得 C s E I N 3 基因序列， 然后通過 D N A M A N5 . 2 . 2 軟件分析C s 6 I N 3 基因與西瓜和南瓜的E I N 3 基因的同 源性: 通過直接克隆測序獲得不同性型黃瓜E I N 3 基因序列， 用D N A M A N 5 .

3、 2 . 2 軟件搜索新的S N P s ;并 運用 P r i m e r P r e m i e r 5 . 0 軟件對新發(fā) 現(xiàn)的S N P s 進行限 制性酶切分析， 篩選R F L P 分子標(biāo)記; 通過 N C B I 網(wǎng)站公布的 C S A C S 1 G 和 C S A C S I 基因序列， 進行同 源性分析后， 設(shè)計特異的S C A R 引物來證實是否 C s A C S 1 G 和 C s A C S 1 基因序

4、列的差異在啟動子區(qū); 最后以R I L 群體為材料， 并對C s A C S I G 的S C A R 引物進行群體分析，利用J o i n m a p 3 . 0 軟件將 C s A C S 1 ‘ 的S C A R 標(biāo)記定位在已 構(gòu)建的連鎖圖 譜上?！?結(jié)果】( 1 ) 通過克隆測序獲得黃瓜、 西瓜和南瓜的 E I N 3 A因序列， 并分別命名為:C S E I N 3 , C I E I N 3 R C m E I N 3

5、 ，核昔酸序列長7 2 5 b p ，分別編碼2 4 1 個氨基酸殘基。這三個基因序列均己成功登錄G e n e B a n k ， 登錄號如下:C S E I , ”為A Y 9 7 3 2 7 5 ,C I E I N 3 為 班 迫 絲 晝 組， C m E I N , ， 為 p 9 0 2 3 2 2 3 。 利用 D N A M A N 5 . 2 . 2 軟件進行同 源性分析表明: 黃瓜、 西瓜、 南瓜三者之間核普酸同

6、 源性相當(dāng)高: C s E I N . - C I E I N , 偽9 9 . 3 % ,C I E I N 3 - C m E I N 3 為 9 9 . 6 9 6 , C s E I M- C m E I N 3 , 為 9 9 . 7 % ; 三個作物之間 堿基的點突變率為0 , 6 % ， 大約1 4 5 6 p 有一個點突變。 將正確翻譯的氨基酸序列進行同 源性比 對表明: C s E I N 3 - C I E I N

7、 3 為9 8 . 8 % , C l E I N 3 - C m E I N 3 為9 9 . 8 % , C s E I N 3 - C m E I N 3 為1 0 0 % 0黃瓜、 西瓜和南 瓜的 E I N 3 蛋白 在氨基酸水平上的同 源性相當(dāng) 高。 C s E I N 3 t A 昔酸序列通過N C B I 網(wǎng)站B L A S T n 對所有G e n e b a n k 收錄的植物的E I N 3 基因 進行同源性比