中腦神經(jīng)前體細(xì)胞誘導(dǎo)分化及Prepro-NTN基因克隆.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中腦神經(jīng)前體細(xì)胞誘導(dǎo)分化及PreproNTN基因克隆姓名：孫秀申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：陳生弟2001.4.1————xssasasFt竺Yr—一一—細(xì)胞數(shù)目及促進TH陽性細(xì)胞形態(tài)發(fā)育。Mes42細(xì)胞條件培養(yǎng)基、B49細(xì)胞條件培養(yǎng)基分別和各自的細(xì)胞膜裂解碎片以及細(xì)胞因子IL11LIFGDNFILla共同培養(yǎng)神經(jīng)前體細(xì)胞，TH陽性細(xì)胞數(shù)目無明顯增加，但形態(tài)更趨成熟。而紋狀體神經(jīng)前體細(xì)胞在上述分化

2、培養(yǎng)基內(nèi)無明顯的TH陽性細(xì)胞分化。體外培養(yǎng)的中腦神經(jīng)前體細(xì)胞為研究DA能神經(jīng)元的發(fā)育和PD的移植治療提供有效、可靠及充足的供體細(xì)胞。卜第三部分1L1a對中腦和紋狀體神經(jīng)前體細(xì)胞Nurrl基因的誘導(dǎo)表達夕(Nurr，是“T”基因表達有重要“控作用的”錄因子IL1可誘”中腦神經(jīng)前體細(xì)胞向TH陽性細(xì)胞方向分化，但其誘導(dǎo)機制與Nurrl是否有關(guān)尚不清晰。本部分實驗采用RTPCRWesternBlot和免疫熒光染色方法觀察了中腦和紋狀體神經(jīng)前體細(xì)

3、胞內(nèi)NurrlmRNA和蛋白質(zhì)的表達。中腦和紋狀體神經(jīng)前體細(xì)胞均表達NurrlmRNA和蛋白質(zhì)，中腦神經(jīng)前體細(xì)胞的Nurrl表達量多于紋狀體神經(jīng)前體細(xì)胞，提示NurrI與中腦神經(jīng)元的發(fā)育密切相關(guān)。采用RTPCR方法研究IL1a對中腦和紋狀體神經(jīng)前體細(xì)胞NurrlmRNA的誘導(dǎo)表達作用。IL1a可誘導(dǎo)中腦神經(jīng)前體細(xì)胞NurrImRNA的快速表達，IL1a(l00pgml)作用1小時后，NurrlmRNA表達增加，3小時后，NurrImRN

4、A表達達到高峰，24小時后恢復(fù)至基線水平。而紋狀體神經(jīng)前體細(xì)胞的NurrlmRNA在IL1a誘導(dǎo)后無明顯變化。提示IL1?？赡芡ㄟ^Nurr1的過度表達促進中腦神經(jīng)前體細(xì)胞向DA能神經(jīng)元方向分化。獷第四部分Neurturin驀因的克隆及其對神經(jīng)細(xì)胞的營養(yǎng)作用。戶eurturin(NTN，是對DA能神經(jīng)元有營養(yǎng)、支持和保護作用的神經(jīng)營養(yǎng)因子，是PD治療的潛在有效因子。本部分實驗采用RTPCR方法獲取PreproneurturincDNA，并