虎杖內(nèi)生真菌與有效成分的相關(guān)性研究.pdf

1、虎杖為蓼科Polygonaceae植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根及根莖。因其生態(tài)環(huán)境的差異，不同產(chǎn)地的藥材品質(zhì)有別。品質(zhì)的差異性與其微生態(tài)有著密切的關(guān)系，研究內(nèi)生真菌與植物代謝之間的相關(guān)性可以揭示不同產(chǎn)地藥材產(chǎn)生差異性的原因，為虎杖的品質(zhì)調(diào)控提供科學(xué)的依據(jù)。
　　通過對(duì)郫縣、都江堰市、巴州區(qū)、松潘縣4個(gè)不同地點(diǎn)以及根莖、莖、葉3個(gè)不同組織器官的虎杖進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離，結(jié)果分離出

2、的167株內(nèi)生真菌，經(jīng)鑒定為2目4科27屬。從總數(shù)量上看，優(yōu)勢(shì)菌群為叢梗孢目(Moniliales)和黑盤孢目(Melanconiales);在科的水平優(yōu)勢(shì)菌群為叢梗孢科(Moniliaceae)和暗色孢科(Dematiaceae);在屬的分類水平上優(yōu)勢(shì)種群為曲霉屬(Aspergillus)、鐮孢屬（Fusarium）、地霉屬(Geotrichum)、膠帚霉屬(Gliocladium)。
　　取從郫縣、都江堰市、巴州區(qū)、松潘縣4地

3、點(diǎn)虎杖的根莖中分離的103株內(nèi)生真菌進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，采用TLC法、HPLC法對(duì)其次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn):菌株G21、G33可產(chǎn)虎杖苷，效果明顯，其余7株代謝產(chǎn)物中也發(fā)現(xiàn)有虎杖苷;菌株G6-1、3-4-2可產(chǎn)大黃素，效果明顯，其余3株也可產(chǎn)大黃素;菌株G6-1、G24、12-2既可產(chǎn)虎杖苷又可產(chǎn)大黃素。最后篩選出相關(guān)內(nèi)生真菌11株G24、12-2、G12-1、3-4-2、2-4-3、G21、G33、G38-2、G13-1、G6-

4、1、G1-1-2。
　　通過對(duì)虎杖愈傷組織誘導(dǎo)條件進(jìn)行考察得:葉柄為虎杖愈傷組織誘導(dǎo)的最佳外植體，相應(yīng)的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)激素為:Ⅱ MS+6-BA3.0mg/L+KT0.2mg/L+2，4-D0.5mg/L;應(yīng)用Box-Benhnken設(shè)計(jì)對(duì)愈傷組織繼代增殖條件進(jìn)行優(yōu)化，得出繼代最佳激素水平為:MS+6-BA1.9 mg/L+ KT0.4 mg/L+2，4-D0.5 mg/L。
　　通過內(nèi)生真菌誘導(dǎo)子和虎杖懸浮細(xì)胞共培養(yǎng)，采用H

5、PLC法對(duì)共培養(yǎng)后細(xì)胞中虎杖苷和大黃素進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn):
　　在共培養(yǎng)體系中，誘導(dǎo)子（菌株G6-1、G21、G13-1、12-2、3-4-2）使懸浮細(xì)胞中的虎杖苷含量增加，表明這些菌株作為誘導(dǎo)子可能會(huì)促進(jìn)懸浮細(xì)胞中虎杖苷的合成，且誘導(dǎo)子（菌株G6-1、G21）對(duì)虎杖苷促進(jìn)作用最明顯。誘導(dǎo)子（菌株G12-1、G33、G38-2、G1-1-2）使懸浮細(xì)胞中的虎杖苷含量減少，表明這些菌株作為誘導(dǎo)子可能會(huì)抑制懸浮細(xì)胞中虎杖苷的合成，且菌株G1

6、2-1、G33作用較明顯，分別使虎杖苷含量降低。誘導(dǎo)子（菌株2-4-3、G24）在虎杖懸浮愈傷組織中檢測(cè)不到虎杖苷，表明這類菌株可能會(huì)阻礙虎杖苷的合成過程。
　　在共培養(yǎng)體系中，誘導(dǎo)子（菌株2-4-3、G1-1-2、G24）使懸浮細(xì)胞中的大黃素含量增加，表明這些菌株作為誘導(dǎo)子可能會(huì)促進(jìn)懸浮細(xì)胞中大黃素的合成，其中菌株2-4-3、G1-1-2促進(jìn)作用最明顯。誘導(dǎo)子(菌株G33、G13-1、G38-2、3-4-2、G12-2、G21、