四環(huán)素、沙丁胺醇、特布他林酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法的建立.pdf

1、隨著社會(huì)的進(jìn)步，人們的生活水平提高了，對(duì)肉蛋等動(dòng)物性食品的需求量也大大增加，因此現(xiàn)代的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展非常迅速，但在發(fā)展的同時(shí)，有一個(gè)問(wèn)題不得不引起人們的重視，那就是一些藥物的使用問(wèn)題。一些經(jīng)營(yíng)者在經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)使下，在養(yǎng)殖業(yè)中大量使用四環(huán)素、沙丁胺醇、特布他林等藥物用于治療畜禽疾病或作為促生長(zhǎng)劑。這些藥物的大量使用不可避免使其殘留于動(dòng)物的肌肉、蛋、奶、臟器、組織中，進(jìn)而通過(guò)食物鏈影響人體健康，因此食品安全問(wèn)題已引起全世界的高度重視。 為

2、了保障消費(fèi)者的生命安全，越來(lái)越多的國(guó)家已建立了一些藥物殘留的檢測(cè)方法。傳統(tǒng)的分析方法包括HPLC、LC．MS、GC-MS等儀器法。這些方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可靠，可以作為標(biāo)準(zhǔn)方法，但儀器設(shè)備昂貴，樣品前處理復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，費(fèi)力，不易普及，因此必須建立快速、靈敏、有效的檢測(cè)方法。酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(ELISA)克服了以上方法的缺點(diǎn)，是一種快速、靈敏、方便、易普及的檢測(cè)方法，有著廣闊的發(fā)展前景。因此，本論文旨在建立四環(huán)素、沙丁胺醇和特布他林的酶聯(lián)免疫檢測(cè)

3、法(ELISA)。 對(duì)于四環(huán)素的研究，以O(shè)-tolidine法、對(duì)氨基苯甲酸(ABA)法、CDI法合成了四環(huán)素的三種免疫原TC-Tolidine．BSA、TC-ABA-cBSA、TC-CDI-cBSA，用所制備的三種免疫原免疫新西蘭白兔獲得了抗四環(huán)素抗體。每一種抗體都用三種包被抗原TC-Tolidine-OVA、TC-ABA-OVA、TC-CDI-OVA進(jìn)行正交試驗(yàn)，據(jù)此得到最佳的抗體-包被抗原的組合為T(mén)C-CDI-cBSA免疫

4、得到的抗體和TC-ABA-OVA作為包被抗原。根據(jù)這個(gè)組合得到的四環(huán)素抗體的IC<,50>是3.92μg/mL，檢測(cè)限為0.011μg/mL，線性范圍為0.1-100μg/mL。該抗體對(duì)金霉素和土霉素的交叉反應(yīng)率分別為112﹪和小于2﹪。四環(huán)素在牛奶中的添加回收率在74-116﹪之間，批內(nèi)變異系數(shù)低于15﹪，批問(wèn)變異系數(shù)低于25﹪。 對(duì)沙丁胺醇，本研究用對(duì)氨基苯甲酸(ABA)法和CDI法合成了沙丁胺醇的兩種免疫原SAL-ABA-

5、cBSA、SAL-CDI-cBSA，用所制備的免疫原免疫新西蘭白兔獲得了兩種抗沙丁胺醇抗體。用SAL-CDI-cBSA所獲得的抗血清用異型包被抗原SAL-BDE-OVA檢測(cè)時(shí)，沙丁胺醇抗體的IC<,50>是9.86 ng/mL，檢測(cè)限(LOD)是0.8 ng/mL，線性范圍為2.6-50 ng/mL；用SAL-ABA-cBSA所獲得的抗血清用異型包被抗原CL-OVA檢測(cè)時(shí)，抗體表現(xiàn)了較好的特異性，沙丁胺醇抗體的IC<,50>為8.97

6、ng/mL，檢測(cè)限(LOD)是0.1 ng/mL，線性范圍為0.8-1000 ng/mL。該抗體對(duì)鹽酸克倫特羅(107﹪)和硫酸特布他林(10﹪)表現(xiàn)了很大的交叉反應(yīng)率，但對(duì)鹽酸萊克多巴胺和腎上腺素幾乎無(wú)交叉，用該抗體進(jìn)行沙丁胺醇在豬肝中的添加回收率實(shí)驗(yàn)，測(cè)得回收率在70-99﹪之間，批內(nèi)變異系數(shù)13.3-3.5﹪，批間變異系數(shù)14.3-5.5﹪。對(duì)于特布他林，本論文以對(duì)氨基苯甲酸(ABA)法和BDE方法合成了特布他林的兩種免疫原TER

7、-ABA-cBSA和TER-BDE-cBSA，用所制備的兩種免疫原免疫新西蘭白兔獲得了兩種抗特布他林的抗體。用TER-ABA-cBSA所獲得的抗血清用異型包被抗原TER-BDE-OVA檢測(cè)時(shí)，抗體表現(xiàn)了較好的特異性，特布他林抗體的IC<,50>為21.4 ng/mL，檢測(cè)限(LOD)是1 ng/mL，線性范圍為4-200 ng/mL；用TER-BDE-cBSA所獲得的抗血清用異型包被抗原TER-ABA-OVA檢測(cè)時(shí)，抗體表現(xiàn)了較好的特異

8、性，特布他林抗體的IC<,50>為9.25 ng/mL，檢測(cè)限(LOD)是0.3 ng/mL，線性范圍為0.8-100 ng/mL，該抗體對(duì)鹽酸克倫特羅(93.9﹪)和沙丁胺醇(94.9﹪)表現(xiàn)了很大的交叉反應(yīng)率，但對(duì)鹽酸萊克多巴胺和腎上腺素幾乎無(wú)交叉，用該抗體進(jìn)行特布他林在豬尿中的添加回收率實(shí)驗(yàn)，測(cè)得回收率在80-99﹪之間，批內(nèi)變異系數(shù)12.5-2.2﹪，批間變異系數(shù)12.2-5.2﹪。 通過(guò)本課題的研究，我們成功地制備了四