聯(lián)苯菊酯和氯氟氰菊酯酶聯(lián)免疫吸附測定法研究.pdf

1、為探討有關(guān)擬除蟲菊酯類殺蟲劑的免疫化學(xué)特性，選擇了兩個代表性的品種聯(lián)苯菊酯和氯氟氰菊酯為研究對象。建立了聯(lián)苯菊酯和聯(lián)苯醇的間接競爭性酶聯(lián)免疫吸附測定方法；并進(jìn)行了半抗原設(shè)計與其抗體特異性關(guān)系的初探。 利用聯(lián)苯菊酯的代謝物聯(lián)苯醇合成了聯(lián)苯菊酯的半抗原LBc(2-甲基-3-苯基芐基氧基羰基丙酸)、LBs(2-甲基-3-苯基芐基-3-羧基-2，2-二甲基環(huán)丙烷羧酸)和LBy(2-甲基-3-苯基苯甲酸)。通過碳二亞胺法將LBc和LBs交

2、聯(lián)于牛血清蛋白(BSA)作為免疫抗原，通過活潑酯法將分別LBc、LBs和LBy交聯(lián)于卵清蛋白(OVA)作為包被抗原，LBc-BSA和LBs為免疫原制備了聯(lián)苯菊酯的兔抗血清，非競爭間接酶聯(lián)免疫吸附分析方法測得其效價達(dá)5.12×10<'4>和3.2×10<'5>。通過同源異源分析，發(fā)現(xiàn)異源分析的靈敏度較高，并對pH值、離子強(qiáng)度、甲醇含量等影響因素進(jìn)行了研究，確定pH7.5、0.3M鈉離子強(qiáng)度的磷酸緩沖液和30％的甲醇為聯(lián)苯菊酯間接競爭酶聯(lián)免

3、疫吸附分析方法的最佳工作條件，該方法的IC<,50>為2.16mg/L，最低檢測限(LDL)為0.016mg/L。對大部分?jǐn)M除蟲菊酯，如氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯和擬除蟲菊酯的代謝物3-苯氧基苯甲酸沒有明顯的交叉反應(yīng)。用抗體LBc-Ab，Lby-OVA的組合建立了聯(lián)苯醇的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析方法，該方法的IC<,50>為1.38μg/L，最低檢測限(LDL)為0.056μg/L，對其他擬除蟲菊酯及其代謝物沒有

4、交叉反應(yīng)。 通過對氯氟氰菊酯分子結(jié)構(gòu)中的酸部分接4-氨基丁酸(HCA1)和醇部分接丁二酸酐(HCB2)，合成兩種不同的半抗原，并通過碳二亞胺法將HCA1和HCB2分別與牛血清蛋白(BSA)偶聯(lián)制備了人工抗原HCA1-BSA和HCB2-BSA，通過活潑酯法將HCA1、HCAS和HCB2分別與卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)制備包被抗原，兩種人工抗原通過免疫新西蘭大白兔來制備相應(yīng)的多克隆抗體。結(jié)果表明，用HCA1-BSA獲得的多克隆抗體對氯氟