PGRP雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法的建立及其在小細(xì)胞肺癌診斷中的應(yīng)用.pdf

1、早期流行病學(xué)研究表明鈾礦工肺癌以小細(xì)胞肺癌為主。肺癌是目前發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，按病理亞型可分為小細(xì)胞肺癌（s mall cell lung cancer，SCLC）和非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NS C LC），其中S C LC占所有肺癌患者的20-25％。SC LC分化程度較差，惡性程度較高，早期易發(fā)生遠(yuǎn)外轉(zhuǎn)移，其最大的特點(diǎn)是對(duì)放化療比較敏感，但通過病理及影像學(xué)方法難以獲得早期診斷，可

2、見SC LC的早期診斷尤為重要。
　　胃泌素釋放肽前體（pro-gastrin releas ing peptide，PGRP）作為小細(xì)胞肺癌腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用價(jià)值已得到認(rèn)可，在SC LC的早期診斷方面具有重要價(jià)值。
　　本文通過調(diào)研國(guó)內(nèi)外人血清PG RP濃度檢測(cè)方法，利用人工合成胃泌素釋放肽前體抗原肽段（“N”—GSLKQQLREYIR；NLLGLIEAK;KENRNHQPPQ PKALG—“C”）的3個(gè)抗原位點(diǎn)對(duì)本實(shí)驗(yàn)

3、室自行研制的19株單克隆抗體進(jìn)行篩選，以結(jié)合抗原能力最強(qiáng)的單克隆抗體作為包被抗體。采用改良過碘酸鈉法對(duì)篩選到的檢測(cè)抗體進(jìn)行辣根過氧化酶（horseradish peroxidase，HRP）的標(biāo)記；選擇標(biāo)記效果好、免疫活性佳的單克隆抗體作為檢測(cè)抗體。利用合成的肽段確定經(jīng)篩選的檢測(cè)抗體和包被抗體結(jié)合不同抗原決定簇的特性，建立PGR P雙單克隆抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immune sorbent assay，E

4、LISA）檢測(cè)法。與市售德國(guó)IBL公司生產(chǎn)人血清PGRP檢測(cè)試劑盒（ELISA法）采取配對(duì)實(shí)驗(yàn)共同檢測(cè)癌癥病人血清濃度，以評(píng)價(jià)本方法有效性及可行性。
　　結(jié)果在19株單克隆抗體中，E12株單抗和PG RP抗原結(jié)合能力最強(qiáng)，可作為包被抗體；ED1與DD2免疫活性強(qiáng)且與包被抗體具有不同的抗原結(jié)合位點(diǎn)，可作為酶標(biāo)檢測(cè)抗體。通過 E12、ED1、D D2建立的雙抗夾心法具有檢測(cè)背景值偏低、檢測(cè)曲線線性良好、檢測(cè)范圍寬等優(yōu)點(diǎn)；在與市售IBL

5、公司試劑盒采用配對(duì)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)67例癌癥病人血清PGRP濃度實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，本方法檢測(cè)靈敏度100%，特異度98.4%，IBL試劑盒檢測(cè)靈敏度為100%，特異度92.2%。比較兩種方法檢測(cè)差異度，采用確切概率卡方檢驗(yàn)法計(jì)算得出 P=1＞0.05，由此推論兩種方法檢測(cè)沒有顯著差異。
　　本文利用抗原肽段篩選出可用于包被捕獲及酶標(biāo)檢測(cè)的單克隆抗體，并建立雙單克隆抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法，在降低檢測(cè)背景值、避免結(jié)果值偏低和避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果等