噻呋酰胺殘留酶聯(lián)免疫吸附分析方法的建立.pdf

1、農(nóng)藥的合理使用能有效地提高農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量，促進(jìn)了農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。噻呋酰胺是一種作用廣泛的含氟殺菌劑，可有效防治谷物，水果，蔬菜中的多種病害。盡管噻呋酰胺是一種低毒農(nóng)藥，它的殘留情況卻依然不容忽視。隨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)活動(dòng)中對(duì)噻呋酰胺的需求量加大的同時(shí)，人們?cè)谌粘Ｉ钪信c之接觸的風(fēng)險(xiǎn)也在逐漸升高，使人類健康受到威脅。農(nóng)藥殘留情況一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)，也是食品安全問(wèn)題中急需解決的重點(diǎn)。
　　現(xiàn)有的噻呋酰胺殘留的檢測(cè)方法僅僅局限于高效液相色譜法(

2、HPLC)，氣相色譜法(GC)等化學(xué)檢測(cè)方法，此類方法不僅操作復(fù)雜，耗時(shí)耗力，而且無(wú)法擺脫對(duì)大型儀器和專業(yè)操作人員的依賴，因此有必要建立一種更為方便、迅速、靈敏、儀器要求不高的方法來(lái)對(duì)噻呋酰胺的殘留進(jìn)行有效檢測(cè)，酶聯(lián)免疫吸附分析方法(ELISA)則合此要求。
　　本研究以2-甲基-4-三氟甲基-5-噻唑甲酸為半抗原，采用活潑酯法、混合酸酐法、CDI/DMAP法合成了免疫原Hapten-1-BSA和包被原Hapten-1-OVA-1

3、、Hapten-1-OVA-2、Hapten-1-OVA-3;以2，6-二溴-4-三氟甲氧基苯胺為半抗原，采用重氮法合成了免疫原Hapten-2-BSA和包被原Hapten-2-OVA。用合成的兩種免疫原免疫雌性Balb/c小鼠，獲得兩種不同的噻呋酰胺多克隆抗體，建立了兩種噻呋酰胺殘留的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA(ic-ELISA)檢測(cè)方法。
　　結(jié)果表明，所有人工抗原經(jīng)紫外吸收光譜掃描和SDS-PAGE鑒定合成成功，免疫小鼠后獲得了兩種

4、不同的噻呋酰胺多克隆抗體。其中，以PAb-1和Hapten-1-OVA-3建立了ELISA-1，對(duì)噻呋酰胺的IC50為1.39 mg/L，最低檢測(cè)限(LOD)為0.074 mg/L;以PAb-2和Hapten-2-OVA建立了ELISA-2，對(duì)噻呋酰胺的IC50為1.96 mg/L，LOD為0.082 mg/L。交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩種抗體對(duì)噻呋酰胺都具有較高的特異性，與其它類似物無(wú)交叉反應(yīng)。添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩種ELISA方法的回