p160 Rock-1缺失小鼠UUO模型腎小管間質(zhì)纖維化機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：腎小管間質(zhì)纖維化(Renaltubulointerstitialfibrosis)是多種慢性腎臟疾病如慢性腎炎、慢性腎盂腎炎、狼瘡性腎炎、糖尿病腎病發(fā)展到終末期腎衰竭的共同途徑。它以過量細(xì)胞外基質(zhì)(如：膠原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型、纖維連接蛋白和層粘連蛋白)在間質(zhì)區(qū)積聚以及成纖維細(xì)胞增生為特征。TGF-β1被認(rèn)為是致纖維化信號傳導(dǎo)通路中的重要因子，在腎間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展的多個環(huán)節(jié)中起作用。TGF-β1引起腎臟小管間質(zhì)纖維化的下游信號主要有

2、p38MAPK、Smads和RhoA/Rock三條通路。p38MAPK與細(xì)胞凋亡有關(guān)；Smads蛋白是一組信號傳遞蛋白，其中Smad2/3、Smad7在纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用；RhoA/Rock信號通路以影響細(xì)胞張力纖維形成和肌球蛋白輕鏈磷酸化等多種不同機(jī)制參與腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展。Rock-1和Rock-2是Rho下游的兩種激酶，它們可以調(diào)節(jié)肌動蛋白的構(gòu)成，影響細(xì)胞的運(yùn)動和細(xì)胞漿移動。TGF-β1除了導(dǎo)致纖維化的發(fā)生發(fā)

3、展外，還有抗炎、抗腫瘤、組織修復(fù)等多種功能，抑制或敲除該基因可以在一定程度上阻止或減輕腎小管間質(zhì)纖維化的進(jìn)程，但同時也會影響其正常的生理功能。因此，通過尋找TGF-β1的致纖維化下游信號通路分子，不僅可以阻斷TGF-β1的致纖維化作用，而且又不會影響其正面效應(yīng)，將為腎臟纖維化的防治提供新的治療靶。 目的：研究在Rock-1基因敲除(Rock-1Knockout，Rock-1KO)小鼠的單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UnilateralUret

4、eralObstruction，UUO)腎間質(zhì)纖維化模型中，腎小管間質(zhì)纖維化指標(biāo)的變化，及其纖維化信號通路中重要信號分子如TGF-β1、Smad2/3和Rock2等的變化，探討腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生機(jī)制。 方法：實(shí)驗(yàn)用UUO腎間質(zhì)纖維化模型作為研究模型。實(shí)驗(yàn)選用Rock-1KO健康雌雄配對小鼠26只，Rock-1WT(wildtype，即基因表型正常)小鼠22只，根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究時間分為5天組和10天組。各組中分別包括：Rock-1

5、KO-UUO組，Rock-1KO正常組(非手術(shù)組)，Rock-1WT-UUO組，Rock-1WT正常組(非手術(shù)組)。分別于術(shù)后5天、10天處死各組動物。運(yùn)用免疫組化、Western-blot、RealtimePCR等實(shí)驗(yàn)技術(shù)觀察兩組動物的Rock-2、TGF-β1、p-Smad2/3(磷酸化Smad2/3)以及膠原Ⅰ、Ⅲ、纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SmoothMuscleActin，α-SMA

6、)的表達(dá)水平變化。 結(jié)果：與Rock-1WT-UUO小鼠相比，TGF-β1在Rock-1KO-UUO小鼠模型的第5天顯著增加(P＜0.05)，第10天無明顯變化(P＞0.05)；p-smad2/3在第5和10天均顯著增加(P＜O.05)。而兩者在Rock-1KO正常組小鼠的表達(dá)無明顯改變(P＞0.05)。膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ、FN和α-SMAmRNA表達(dá)在第5天和第10天的Rock-1KO小鼠與WT小鼠UUO模型中均無顯著性差異(P＞