妊娠期哮喘誘導(dǎo)子代腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞向交感神經(jīng)元轉(zhuǎn)變機(jī)制.pdf

1、背景:腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞（AMCC）分泌腎上腺素在支氣管哮喘調(diào)節(jié)支氣管收縮與舒張功能中發(fā)揮作用。表觀遺傳學(xué)研究提示，胎兒時(shí)期母體宮內(nèi)環(huán)境的異?？梢杂≯E成年疾病的發(fā)生，AMCC在發(fā)育分化中受到母體宮內(nèi)各個(gè)環(huán)節(jié)影響，其分化的最終結(jié)果可能導(dǎo)致腎上腺素分泌和/合成障礙，加重支氣管哮喘的發(fā)病。
　　 目的:探討妊娠期哮喘對子代腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞向交感神經(jīng)元轉(zhuǎn)變的的機(jī)制及對子代支氣管哮喘發(fā)病的影響。
　　 方法:32只妊娠大鼠分為正常對

2、照組(CP)、哮喘組(AP)、NGF組(NP)和anti-NGF組(ANP)建立妊娠哮喘大鼠模型，產(chǎn)下子代，CP、AP、NP和ANP各組子代分別為OCP、OAP、ONP、OANP，觀察各組大鼠及其所產(chǎn)子代在生后3天(P3)、出生后7天(P7)、出生后14天(P14)、出生后30天(P30)、出生后60天(P60)及成年期再給予OVA致敏及激發(fā)后血清腎上腺素(EPI)、神經(jīng)生長因子(NGF)、皮質(zhì)酮水平，腎上腺髓質(zhì)的結(jié)構(gòu)的改變，腎上腺髓質(zhì)

3、中NGF、苯乙醇胺N甲基轉(zhuǎn)移酶(PNMT)、Rho-GDP解離抑制因子α(Rho GDIα)和外周蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、各組母代大鼠的腎上腺髓質(zhì)變化
　　 AP組血清EPI水平無明顯升高，電鏡下AMCC線粒體腫脹、脂質(zhì)增多、嗜鉻顆粒濃度降低、細(xì)胞出現(xiàn)突起樣改變;NP組血清EPI水平較CP組降低，腎上腺髓質(zhì)病變較AP組進(jìn)一步加重，ANP組中上述病變有所改善。
　　 2、各組子代發(fā)育期腎上

4、腺髓質(zhì)的變化
　　 OAP組及ONP組大鼠從P3到P14，AMCC腫脹、脫失、空泡化，EPI分泌顆粒出現(xiàn)數(shù)量減少，可見突起形成，細(xì)胞核梭形樣變。從P30到P60，AMCC空泡樣變性減少，EPI分泌顆粒逐漸增多。
　　 從P3至P14，OAP組大鼠血清EPI水平較對照組減少(P＜0.05)，從P30至P60血清EPI與OCP組大鼠比較無明顯差異，而ONP組組大鼠從P3直至P60，血清EPI水平均較對照組降低(P＜0.05)

5、。從P3至P7，OAP及ONP組大鼠血清NGF水平較對照組增加(P＜0.05)，從P14至P60，兩組血清NGF水平與OCP組比較無明顯差異。在各組子代成長過程中，P3至P60，OAP及ONP組大鼠血清皮質(zhì)酮水平較OCP組明顯增加(P＜0.05)。P3至P14，OAP組大鼠PNMT在腎上腺髓質(zhì)的表達(dá)較OCP組是減少的(P＜0.05)，而ONP組大鼠從P3至P60，PNMT的表達(dá)均較OCP組降低(P＜0.05)。從P3至P14，OAP及O

6、NP組大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞中NGF表達(dá)較對照組是增加的(P＜0.05)。
　　 3、OVA致敏及攻擊后子代腎上腺髓質(zhì)變化
　　 各組子代大鼠成年后給予OVA致敏及攻擊，ONP組大鼠氣道高反應(yīng)性及氣道炎癥明顯增加，OAP組大鼠AMCC出現(xiàn)明顯的空泡樣變性，電鏡顯示線粒體水腫，脂質(zhì)增多，EPI分泌顆粒減少。ONP組大鼠AMCC神經(jīng)元表型的改變較OAP組更為明顯，EPI分泌顆粒減少明顯，甚至消失，EPI分泌及釋放減少，OAP

7、與ONP組大鼠血清中EPI降低，ONP組尤為明顯，ONP組大鼠腎上腺髓質(zhì)中PNMT表達(dá)明顯減少，NGF表達(dá)明顯增多(P＜0.05)。ONP組大鼠血清皮質(zhì)酮水平較OCP組明顯增加(P＜0.05)。
　　 4、各組子代發(fā)育期及OVA致敏及攻擊后外周蛋白與Rho GDIα表達(dá)
　　 OCP組子代在P3時(shí)可以觀察到較弱的外周蛋白表達(dá)，P7時(shí)表達(dá)逐漸增強(qiáng)，P14時(shí)達(dá)其峰值，然后減少，從P30到P60保持較低的水平。OAP及ONP組

8、大鼠從P3至P14較OCP組有較強(qiáng)的外周蛋白表達(dá)(P＜0.05)，從P30到P60，OAP組大鼠的外周蛋白表達(dá)OCP組大鼠比較無明顯差異，而ONP組大鼠明顯減少(P＜0.05)。成年后，各組子代大鼠給予OVA致敏及攻擊，OAP組、ONP組腎上腺髓質(zhì)中外周蛋白表達(dá)水平增強(qiáng)，且ONP組的外周蛋白表達(dá)水平高于OAP組(P＜0.05)，OANP組外周蛋白水平表達(dá)較OCP組降低(P＜0.05)。正常組的子代大鼠腎上腺髓質(zhì)中Rho GDIα從P3到

9、P14表達(dá)較弱，從P30到P60表達(dá)P14表達(dá)開始增加。OAP組大鼠出生后，從P3至P14表達(dá)較OCP組弱，從P30到P60，Rho GDIα表達(dá)與OCP組無明顯差異，但ONP組Rho GDIα表達(dá)從P3至P60均較OCP組減少。從P3到P14，OANP組Rho GDIα表達(dá)與OAP組比較明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，但從P30到P60，與OAP組比較無明顯差異。成年后，各組子代大鼠給予OVA致敏及攻擊，OAP組Rho GDIα表達(dá)水平減少

10、，ONP組的表達(dá)低于OAP組(P＜0.05)。OANP組的Rho GDIα表達(dá)水平較OAP組增加。
　　 結(jié)論:我們從腎上腺髓質(zhì)發(fā)育學(xué)角度發(fā)現(xiàn)哮喘妊娠宮內(nèi)高濃度的NGF暴露時(shí)，可以啟動子代大鼠腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞的功能冗余性使其表型和功能發(fā)生轉(zhuǎn)化，當(dāng)其成年后受到OVA攻擊促使AMCC腎上腺嗜鉻細(xì)胞向交感神經(jīng)元分化，延緩或/和抑制了腎上腺髓質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的成熟，導(dǎo)致腎上腺素合成受阻，支氣管收縮與舒張功能失衡，加重支氣管哮喘發(fā)病。Rho G