JNK信號通路介導(dǎo)Bex2對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞增殖和凋亡的作用研究.pdf

1、目的：1．檢測人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標本中Bex2的表達水平，分析其與膠質(zhì)瘤發(fā)生的相關(guān)性；2．研究Bex2對U251及U87神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞增殖及凋亡的影響，并探討其作用機制，為膠質(zhì)瘤的基因治療提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法：1．收集臨床神經(jīng)膠質(zhì)瘤手術(shù)標本，通過RT-PCR及Western blot( WB)分別檢測Bex2核酸及蛋白的表達水平，分析Bex2與人腦膠質(zhì)瘤的相關(guān)性；2．構(gòu)建pEGFP-Nl-Bex2真核表達載體，用WB及免

2、疫細胞化學(xué)(ICC)檢測其在U251神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中的過表達效果；CCK-8檢測過表達Bex2對細胞增殖的影響；3．設(shè)計針對人Bex2基因特異性的三條siRNA oligo，并通過RT-PCR及WB檢測其在U251和U87神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中的干擾效果；CCK-8檢測下調(diào)Bex2表達后12h，24h，48h，72h，96h各時間點U251及U87神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞增殖變化；4．AnnexinV／PI染色后用流式細胞術(shù)及Hoechst33258染

3、色檢測下調(diào)Bex2表達后U251、U87神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞凋亡變化；WB檢測下調(diào)Bex2表達后c1eaved caspase-3、cleaved caspase-9的水平；5．在干擾Bex2同時用或不用JNK特異性抑制劑SP600125處理細胞，WB檢測p-JNK、p-c-Jun的水平；流式細胞術(shù)分析U251神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的凋亡情況。
　　 結(jié)果：1．在人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標本中Bex2表達明顯高于非腫瘤腦組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.

4、05)；2．成功構(gòu)建pEGFP-N1-Bex2真核表達載體，過表達Bex2促進細胞增殖；3．三條Bex2特異性siRNA oligo干擾效率均達70％～80％; CCK8檢測細胞增殖結(jié)果顯示：下調(diào)Bex2表達后48h，72h，96h各時間點細胞增殖能力較陰性對照組明顯下降；4．流式細胞術(shù)及Hoechst33258染色結(jié)果顯示下調(diào)Bex2表達后48h細胞凋亡率明顯高于陰性對照組（P＜0.05）；下調(diào)Bex2表達后48hcleaved ca

5、spase-3、cleaved caspase-9水平升高。5．下調(diào)Bex2表達后48h p-JNK、p-c-Jun升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05); JNK特異性抑制劑SP600125處理可陽斷下調(diào)Bex2表達對JNK/c-Jun的激活作用，也取消了下調(diào)Bex2對細胞凋亡的促進作用。
　　 結(jié)論：1．Bex2在膠質(zhì)瘤組織中較非腫瘤腦組織高表達，提示Bex2可能參與了膠質(zhì)瘤發(fā)生；2．Bex2促進U251神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的增殖