轉(zhuǎn)染Cx43cDNA對(duì)腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖及侵襲性的影響及其與ERK-p38MAPK信號(hào)通路的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　將pCMV-Cx43cDNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞,上調(diào)C6細(xì)胞Cx43表達(dá),探討C6細(xì)胞過(guò)表達(dá)Cx43對(duì)其增殖和侵襲性的影響及ERK/p38MAPK信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。
　　方法:
　　通過(guò)脂質(zhì)體將 pCMV-Cx43cDNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入C6細(xì)胞,使C6細(xì)胞過(guò)表達(dá)Cx43,并用G418抗性篩選出穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Cx43的C6細(xì)胞,用Western blot檢測(cè)Cx43蛋白表達(dá);實(shí)驗(yàn)分為C6組、C6-n

2、on組(轉(zhuǎn)染空載體)、C6-Cx43組(轉(zhuǎn)染Cx43),測(cè)定各組細(xì)胞倍增時(shí)間和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)比較各組細(xì)胞集落數(shù)。
　　分別用ERK1/2特異性阻斷劑PD98059、p38MAPK特異性阻斷劑SB20219處理細(xì)胞,MTT比色法檢測(cè)各組細(xì)胞活性;建立體外 Transwell侵襲模型聯(lián)合MTT法,觀察過(guò)表達(dá)Cx43對(duì)C6細(xì)胞侵襲能力的影響;Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞Cx43、p-Cx43、p-ERK1/2、p-p38和P

3、16蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　成功將pCMV-Cx43cDNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入C6細(xì)胞,并用G418篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Cx43基因的細(xì)胞株。C6-Cx43細(xì)胞Cx43蛋白表達(dá)量明顯增加(P<0.01);C6-Cx43組比C6組、C6-non組細(xì)胞增殖速度明顯減慢,細(xì)胞集落數(shù)明顯減少(P<0.01)。
　　MTT比色法、Transwell侵襲模型聯(lián)合MTT法顯示C6-Cx43組比C6組、C6-non組細(xì)胞存活率明顯降低,侵襲

4、能力明顯增強(qiáng)( P<0.01);C6-Cx43+PD98059組、C6-Cx43+SB202190組較C6-Cx43組細(xì)胞存明顯活率降低,侵襲能力明顯增強(qiáng)(P<0.05)。
　　Western blot顯示:C6-Cx43組比C6組、C6-non組Cx43蛋白表達(dá)顯著增多, p-Cx43、p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表達(dá)明顯減少( P<0.01);C6-Cx43+PD98059組、C6-Cx43+SB202190組比

5、C6-Cx43組 p-Cx43、p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表達(dá)顯著下降(P<0.05)。
　　C6-Cx43組比 C6組、C6-non組 P16蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.01),提示Cx43蛋白高表達(dá),促進(jìn)P16蛋白表達(dá)水平明顯增加,兩者呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1. C6細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pCMV-Cx43cDNA,C6-Cx43細(xì)胞Cx43蛋白表達(dá)明顯增加,顯著抑制C6細(xì)胞的增殖,增強(qiáng)C6細(xì)胞侵襲