人臍血源肝干-祖細(xì)胞生物活性及移植的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究人臍血單個(gè)核細(xì)胞在體外定向誘導(dǎo)分化為肝干/祖細(xì)胞以及臍血源肝干/祖細(xì)胞移植于體內(nèi)的生物活性。 方法：一、從臍血中分離出臍血單個(gè)核細(xì)胞，在肝細(xì)胞生長因子(HGF)、干細(xì)胞生長因子(SCF)、成纖維細(xì)胞生長因子-1(FGF-1)、成纖維細(xì)胞生長因子-2(FGF-2)、制瘤素(OSM)、白血病抑制因子(LIF)的共同作用下，誘導(dǎo)分化為肝干/祖細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化，RT-PCR定量測定hALBmRNA，細(xì)胞免疫化學(xué)檢測

2、ALB、CK18、CK19的表達(dá)。二、對(duì)肝損傷和肝損害SCID鼠模型，進(jìn)行人臍血源肝干/祖細(xì)胞體內(nèi)移植，分別在不同時(shí)期檢測SCID鼠外周血中的hCD45水平，肝臟組織中hALBmRNA和hALB蛋白的表達(dá)，以及ALB的免疫表達(dá)情況。 結(jié)果一、體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的細(xì)胞呈肝細(xì)胞樣分化，RT-PCR檢測到hALBmRNA，細(xì)胞免疫化學(xué)顯示部分細(xì)胞CK18、CK19、ALB呈陽性。二、可見大體肝臟：體積略有增大，肝臟表面可見有粟粒狀突起，約

3、芝麻大??；流式細(xì)胞儀在外周血中檢測到有hCD45表達(dá)，6周水平最高，10周后基本測不到；RT-PCR檢測到肝臟組織hALBmRNA的表達(dá)及Western-blot檢測到hALB蛋白的表達(dá)隨移植時(shí)間的延長而增強(qiáng)；免疫組織化學(xué)肝臟中ALB表達(dá)陽性，免疫熒光顯示綠熒光。 結(jié)論一、臍血單個(gè)核細(xì)胞在定向誘導(dǎo)下有分化為肝干/祖細(xì)胞的能力，可以考慮作為肝干/祖細(xì)胞和肝細(xì)胞新的細(xì)胞來源。二、臍血源肝干/祖細(xì)胞可以通過肝實(shí)質(zhì)移植在體內(nèi)進(jìn)一步分化