以EGFR為腫瘤專一性靶點(diǎn)的新型篩選平臺(tái)技術(shù)的建立和初步運(yùn)用.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文以EGFR為腫瘤專一性靶點(diǎn)的新型篩選平臺(tái)技術(shù)的建立和初步運(yùn)用姓名：王華茂申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：顧健人20030514鞋E G F R 為轉(zhuǎn)瘤專一性靶點(diǎn)的裁塑配體薄選平臺(tái)技術(shù)的建它和視步運(yùn)甩 中文摘要表達(dá)，G 4 1 8 篩選得到細(xì)胞克隆，通過(guò)免疫組化和W e s t e r nB l o t 的方法鑒定陽(yáng)性克隆( C 3 3 A —E R ) 。構(gòu)建得到的E G F R 高表達(dá)的C 3 3 A

2、—E R 細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞表面I ”5 E O F 的飽和結(jié)合實(shí)驗(yàn)，通過(guò)S c a t c h a r d 法分析，計(jì)算得出C 3 3 A —E R 的有效受體細(xì)胞數(shù)為2 ．2 X 1 0 6 ／細(xì)胞。利用該細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表面的I ”；E G F 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示是一種準(zhǔn)確性高、靈敏度高而且重復(fù)性好的檢測(cè)配體／受體結(jié)合的方法。然而，該細(xì)胞進(jìn)行G E 7 和G E 7 N和E G F R 的間接的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)不能跟6 E

3、7 和G E 7 N 不能和E G F 競(jìng)爭(zhēng)跟E G F R 的結(jié)合位點(diǎn)( 第二部分) 。為了篩選具有更高親和力的E G F R 的靶向肽，我們用噬菌體多肽展示庫(kù)( P h ．D - 1 2N E B1 2 肽隨機(jī)肽庫(kù)) 進(jìn)行針對(duì)高表達(dá)E G F R 胞外區(qū)的C 3 3 A —E R 細(xì)胞的篩選，我們先后通過(guò)非競(jìng)爭(zhēng)法和競(jìng)爭(zhēng)法進(jìn)行噬菌體庫(kù)的篩選，兩種方法都得到了噬菌體的富集( 分別為5 ／2 3 ，6 ／3 0 ) ，但是通過(guò)進(jìn)一步的E

4、L I S A 反應(yīng)和D N A 測(cè)序分析，未能證實(shí)跟C 3 3 A ．E R有特異結(jié)合( 第三部分) ?？傊?，我們成功的建立了一個(gè)有效的i nv i t r oE G F ／E G F R 結(jié)合系統(tǒng)，通過(guò)這個(gè)系統(tǒng)，我們進(jìn)行了初步的運(yùn)用，而對(duì)這個(gè)平臺(tái)技術(shù)進(jìn)一步利用還有待探索。關(guān)鍵詞：靶向性非病毒基因?qū)胂到y(tǒng)； 表皮生長(zhǎng)因子； 表皮生長(zhǎng)因子受體誘導(dǎo)表達(dá)： 基因工程蛋白；p D i s p l a y 表達(dá)系統(tǒng)； 噬菌體文庫(kù)；W e s t