以EGFR為腫瘤專一性靶點的新型篩選平臺技術(shù)的建立和初步運用.pdf

1、復旦大學碩士學位論文以EGFR為腫瘤專一性靶點的新型篩選平臺技術(shù)的建立和初步運用姓名：王華茂申請學位級別：碩士專業(yè)：病原生物學指導教師：顧健人20030514鞋E G F R 為轉(zhuǎn)瘤專一性靶點的裁塑配體薄選平臺技術(shù)的建它和視步運甩 中文摘要表達，G 4 1 8 篩選得到細胞克隆，通過免疫組化和W e s t e r nB l o t 的方法鑒定陽性克隆( C 3 3 A —E R ) 。構(gòu)建得到的E G F R 高表達的C 3 3 A

2、—E R 細胞，進行細胞表面I ”5 E O F 的飽和結(jié)合實驗，通過S c a t c h a r d 法分析，計算得出C 3 3 A —E R 的有效受體細胞數(shù)為2 ．2 X 1 0 6 ／細胞。利用該細胞進行細胞表面的I ”；E G F 競爭結(jié)合實驗，結(jié)果顯示是一種準確性高、靈敏度高而且重復性好的檢測配體／受體結(jié)合的方法。然而，該細胞進行G E 7 和G E 7 N和E G F R 的間接的競爭結(jié)合實驗，實驗結(jié)果證實不能跟6 E

3、7 和G E 7 N 不能和E G F 競爭跟E G F R 的結(jié)合位點( 第二部分) 。為了篩選具有更高親和力的E G F R 的靶向肽，我們用噬菌體多肽展示庫( P h ．D - 1 2N E B1 2 肽隨機肽庫) 進行針對高表達E G F R 胞外區(qū)的C 3 3 A —E R 細胞的篩選，我們先后通過非競爭法和競爭法進行噬菌體庫的篩選，兩種方法都得到了噬菌體的富集( 分別為5 ／2 3 ，6 ／3 0 ) ，但是通過進一步的E

4、L I S A 反應和D N A 測序分析，未能證實跟C 3 3 A ．E R有特異結(jié)合( 第三部分) ?？傊?，我們成功的建立了一個有效的i nv i t r oE G F ／E G F R 結(jié)合系統(tǒng)，通過這個系統(tǒng)，我們進行了初步的運用，而對這個平臺技術(shù)進一步利用還有待探索。關鍵詞：靶向性非病毒基因?qū)胂到y(tǒng)； 表皮生長因子； 表皮生長因子受體誘導表達： 基因工程蛋白；p D i s p l a y 表達系統(tǒng)； 噬菌體文庫；W e s t