以Aurora B激酶為靶點(diǎn)的高通量藥物篩選.pdf

1、惡性腫瘤是對(duì)人類(lèi)生命和健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅的重大疾病之一?，F(xiàn)階段，臨床上治療惡性腫瘤的方法很多，主要包括手術(shù)治療、放療（放射線(xiàn)治療）、化療（化學(xué)藥物治療）以及分子靶向治療等。尋找特定的藥物篩選靶點(diǎn)，并有針對(duì)性地開(kāi)展低毒、高效、特異性強(qiáng)的新型抗腫瘤藥物的研發(fā)，是一種避免對(duì)其他正常的組織細(xì)胞產(chǎn)生損傷的主要研究途徑。其中，以Aurora B激酶為藥物靶點(diǎn)篩選抗腫瘤類(lèi)藥物的研究開(kāi)發(fā)，已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研究的一個(gè)新熱點(diǎn)。
　　 Aurora B激

2、酶是一種非常保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶，在細(xì)胞周期進(jìn)程中發(fā)揮著重要的作用，諸如影響染色體分離以及胞質(zhì)分裂等。有絲分裂過(guò)程中，Aurora B激酶的調(diào)控一旦出現(xiàn)異常，將對(duì)基因組的穩(wěn)定性產(chǎn)生不良影響，容易誘發(fā)多倍體或非整倍體的產(chǎn)生，進(jìn)而可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。近年來(lái)，研究顯示Aurora B激酶與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在緊密的聯(lián)系，已經(jīng)在多種人類(lèi)的惡性腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)了Aurora B激酶呈過(guò)量表達(dá)狀態(tài)。目前，Aurora B激酶已經(jīng)被公認(rèn)為抗腫瘤類(lèi)藥

3、物研發(fā)的重要靶點(diǎn)，受到了國(guó)內(nèi)外科研機(jī)構(gòu)的高度重視。
　　 本論文主要以Aurora B激酶作為藥物篩選靶點(diǎn)，利用原核表達(dá)系統(tǒng)體外高效地表達(dá)了有活性、可溶的人源Aurora B激酶重組蛋白，并通過(guò)進(jìn)行多步分離與純化，獲得了純度達(dá)90％以上的激酶蛋白，為后續(xù)高通量藥物篩選創(chuàng)造了有利條件。在此基礎(chǔ)上，以AuroraB激酶重組蛋白（野生型）作為靶點(diǎn)，我們?cè)诜肿铀缴匣诜止夤舛确ń⒘说母咄克幬锖Y選模型，并應(yīng)用已知的Aurora B激

4、酶抑制劑Hesperadin對(duì)該藥篩模型進(jìn)行驗(yàn)證，證明了該藥篩模型的正確性，適用于高通量藥物篩選。應(yīng)用該建立的藥篩模型，對(duì)小分子化合物庫(kù)進(jìn)行初篩和復(fù)篩，以及抑制率的計(jì)算和假陽(yáng)性的排除，發(fā)現(xiàn)了一些抑制效果較好的陽(yáng)性化合物，共有16種化合物的抑制率在50％以上，其中有4種化合物的抑制率達(dá)到了80％以上。對(duì)這些篩選出來(lái)的陽(yáng)性化合物，在細(xì)胞水平上利用MTT法分別檢測(cè)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制程度，最終獲得了一種對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果較好化合物，可進(jìn)一