基于Halo-Tag技術(shù)的高通量藥物篩選系統(tǒng)的研究.pdf

1、分類號Q75學(xué)校代碼10129UDC577學(xué)號072100018基于HaloTag技術(shù)的高通量藥物篩選系統(tǒng)的研究ResearchofQuantitativeHighthroughputScreeningSystembasedonHaloTagtechnology申請人：趙亮學(xué)科門類：理學(xué)學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：蛋白質(zhì)化學(xué)指導(dǎo)教師：魏建民教授林堅(jiān)副教授論文提交日期：二〇一一年五月摘要HaloTag蛋白名為鹵代烷脫鹵素酶，是

2、由微生物紫紅紅球菌的脫鹵素酶演化而來。該酶可把鹵代烷烴中的鹵素取代基去除，通過置換脫鹵素酶活性中心的組氨酸，使得烷基殘基可以有效地以共價鍵形式結(jié)合于蛋白上。Halotag蛋白可以非常高效地通過共價鍵與的配體穩(wěn)定結(jié)合，可以與磁珠或其它介質(zhì)親和吸附，用于純化大腸桿菌或哺乳動物細(xì)胞的蛋白。此外，Halotag也可以特異性地通過共價鍵與報告配體或固化配體結(jié)合，來對融合蛋白進(jìn)行熒光檢測或固相吸附等試驗(yàn)操作。依據(jù)HaloTag技術(shù)原理，以結(jié)核分枝桿

3、菌脂肪酸合成酶(mtFabH)，設(shè)計出一系列帶有HaloTag配基的mtFabH靶向小分子化合物，利用HaloTag和PullDown技術(shù)驗(yàn)證靶向小分子化合物是否與mtFabH結(jié)合。結(jié)果表明：1、酶切鑒定和測序以及蛋白表達(dá)純化結(jié)果表明目的蛋白mtFabH成功插入原核表達(dá)載體pET32a()中，得到濃度較高的純重組蛋白HisTrxmtFabH。2、酶切鑒定和測序以及蛋白表達(dá)純化結(jié)果表明目的蛋白HaloTag成功插入原核表達(dá)載體pGEX3X