基于c-myc啟動子的抗腫瘤藥物篩選系統(tǒng).pdf

1、藥物篩選是我國新藥研發(fā)的瓶頸。為此本文建立了基于c-myc啟動子的新型抗腫瘤藥物篩選系統(tǒng)，用于抗腫瘤藥物的篩選和研究藥物作用機理，并對這一系統(tǒng)從原則上進行了驗證。 本文將含有c-myc啟動子和β-半乳糖苷酶報告基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染U2OS細胞，篩選在c-myc啟動子控制下穩(wěn)定表達β-半乳糖苷酶的細胞株。為進行原理驗證，使用阿霉素、五氟尿嘧啶、順氯鉑等常用抗腫瘤藥物通過檢測β-半乳糖苷酶活性來分析該穩(wěn)定表達株的篩選效果。還采用了半定

2、量RT-PCR檢測內(nèi)源RNA，MTT檢測細胞存活率等方法對該藥物篩選系統(tǒng)進行驗證。并使用c-myc啟動子的缺失突變型對阿霉素的作用位點進行了研究。實驗結(jié)果表明在U2OS細胞中阿霉素能顯著下調(diào)c-myc啟動子的活性和c-myc mRNA的量，并發(fā)現(xiàn)阿霉素對c-myc啟動子的作用位點在+66位的P2 啟動子。 綜合以上結(jié)果，本文認為這一基于c-myc啟動子的抗腫瘤藥物篩選系統(tǒng)能夠有效篩選對癌基因c-myc有抑制作用的抗癌藥物。同時阿