靶向蛋白激酶Aurora B的抗腫瘤藥物分子水平篩選模型的建立和抑制劑篩選.pdf

1、近年來,隨著生命科學(xué)研究的飛速進(jìn)展,惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)、血管生成以及細(xì)胞與胞外基質(zhì)的相互作用等各種基本過程正在被逐步闡明,以一些與腫瘤細(xì)胞分化增殖相關(guān)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵酶作為藥物篩選靶點,發(fā)現(xiàn)選擇性作用于特定靶點的高效、低毒、特異性強的新型抗癌藥物已成為當(dāng)今抗腫瘤藥物研究開發(fā)的重要方向。其中絲/蘇氨酸激酶Aurora B正日益成為國際上抗腫瘤藥物研究的熱點。
　　 絲/蘇氨酸蛋白激酶A

2、urora B在大多數(shù)惡性腫瘤中均高表達(dá),在細(xì)胞周期中的作用直接影響了基因組的穩(wěn)定,它的異常調(diào)控可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,Aurora B高表達(dá)與肝細(xì)胞癌、肺癌等腫瘤的預(yù)后也密切相關(guān)。因此,Aurora B被視為具有很好市場潛力的抗腫瘤藥物開發(fā)的一個新靶點,并受到極大的重視。目前已報道的Aurora B激酶抑制劑絕大部分處于臨床前研究,少數(shù)進(jìn)入臨床研究的尚處于Ⅰ/Ⅱ期階段,目前尚無有效的特異性Aurora B激酶抑制劑上市。
　　 基于

3、Aurora B激酶在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的重要作用及目前針對激酶為靶點的抗腫瘤藥物研究現(xiàn)狀,本論文以絲/蘇氨酸蛋白激酶.Aurora B為分子靶點,采用Bac-to-BacTM昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了具有激酶活性的Aurora B激酶活性蛋白,研究了激酶活性和酶濃度、底物濃度及ATP濃度的關(guān)系,確定了酶量為0.5μl/:孔、ATP濃度為20μM,底物濃度為200nM試驗參數(shù)。最后使用Aurora B抑制劑VX680對該模型進(jìn)行了驗證,

4、表明了該模型的可行性,可用于篩選Aurora B激酶的抑制劑。
　　 應(yīng)用建立的模型,我們對182個化合物進(jìn)行了篩選。篩選中發(fā)現(xiàn)了CGM系列5個化合物具有Aurora B激酶抑制活性,其IC50為微摩爾級,其中有兩個化合物對MCF7細(xì)胞中Aurora B激酶活性具有一定的抑制作用。
　　 綜上所述,本研究建立了一個基于酶聯(lián)免疫吸附法原理(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)的穩(wěn)