雞胸肉中焦磷酸酶分離純化、性質(zhì)及與蛋白凝膠特性的關(guān)系研究.pdf

1、本論文包括三方面的內(nèi)容：(1)雞胸肉中分離純化焦磷酸酶。(2)焦磷酸酶特性研究，研究焦磷酸酶的最適反應(yīng)溫度、最適pH值、底物專一性、金屬離子對酶活性的影響等。(3)研究焦磷酸酶活性與蛋白功能特性之間的關(guān)系。 本試驗(yàn)研究了三黃雞胸肉中焦磷酸酶的分離純化方法。雞胸肉經(jīng)勻漿、0.6M NaCl提取、硫酸銨分級分離、DEAE-纖維素離子交換柱層析，從中部分純化了焦磷酸酶。結(jié)果表明，勻漿物的0.25M蔗糖水溶液中焦磷酸酶活力很低，雞胸肉中

2、的焦磷酸酶主要存在于0.6M NaCl提取物中，經(jīng)硫酸銨分級分離，在45-65％飽和度沉淀得到的蛋白比活力最高。硫酸銨沉淀的焦磷酸酶產(chǎn)率為83.04％，比活力為6.11，與粗酶液相比純化倍數(shù)為5.31，經(jīng)DEAE柱層析后，焦磷酸酶的比活力達(dá)到162.75U/mg，與粗酶液相比純化倍數(shù)為141.5。DEAE-纖維素離子交換層析得到單峰，通過SDS-PAGE檢測，該酶分子量為25KDa。 建立了雞胸肉中焦磷酸酶活性的測定方法，同時(shí)對

3、雞胸肉中焦磷酸酶的性質(zhì)進(jìn)行了研究。研究表明，Mg<'2+>是焦磷酸酶的激活劑，對焦磷酸酶活性的穩(wěn)定性發(fā)揮重要作用，Ca<'2+>抑制焦磷酸酶活性。5 mM MgCl<,2>存在條件下，當(dāng)EDTA-Na<,2>濃度由0.1mM增加到1mM時(shí)，與單獨(dú)添加EDTA-Na<,2>相比，焦磷酸酶活力提高，0.1mM EDTA-Na<,2>使焦磷酸酶活性提高了33.8％，1mM EDTA-Na<,2>使焦磷酸酶活性提高了28.4％，EDTA-Na<

4、,2>濃度升高會(huì)抑制焦磷酸酶活性。在本試驗(yàn)中的測活體系中焦磷酸酶的最適反應(yīng)溫度為40℃，最適反應(yīng)pH為7.4。雞胸肉中焦磷酸酶的底物專一性較強(qiáng)，只對焦磷酸四鈉有較強(qiáng)的專一性，對添加其中的STPP、HMP、ATP幾乎沒有解離能力。添加到體系中的NaF和KIO<,3>抑制焦磷酸酶活性。 研究了添加不同的焦磷酸酶的激活劑和抑制劑對蛋白功能特性的影響。在蛋白質(zhì)溶液中添加Mg<'2+>對蛋白溶解度無顯著影響，添加Ca<'2+>能夠顯著降低

5、蛋白溶解度。通過添加焦磷酸酶活性的抑制劑NaF和KIO<,3>觀察不同濃度的NaF和KIO<,3>隨時(shí)間的延長對蛋白溶解度和凝膠保水性的影響，研究結(jié)果表明，在2-6h之內(nèi)，添加NaF的處理組的蛋白溶解度要高于添加KIO<,3>的。在4h時(shí)，10mM濃度以下的NaF和KIO<,3>處理組的蛋白溶解度無顯著性差異(P>0.05)。不同濃度的KIO<,3>對蛋白溶解度影響不同，隨著時(shí)間的延長到12h時(shí)，1mM、5mM、10mM的KIO<,3>