甘薯葉酸性磷酸酶的分離純化、部分性質(zhì)和功能基團(tuán)研究.pdf

1、酸性磷酸酶(Acid phospatase，簡稱ACP)，是一種在酸性環(huán)境中催化磷酸單酯水解釋放出無機(jī)磷酸的水解酶。酸性磷酸酶作為參與磷代謝相關(guān)的重要酶類，對生物體的生理生化和生長狀況有重要作用。目前，酸性磷酸酶已用于某些疾病如前列腺癌、子宮頸癌診斷的重要指標(biāo)，在植物對低磷脅迫和育種上有重要作用。
　　甘薯(Dioscorea esculenta)屬于旋花科甘薯屬甘薯種草本植物，若生長在熱帶地區(qū)，為多年生;若生長在溫帶地區(qū)，為一年

2、生植物。甘薯原產(chǎn)于南美洲，作為一種糧食作物在我國廣泛種植，是我國第四大糧食作物，產(chǎn)量僅次于水稻、小麥和玉米，占世界甘薯產(chǎn)量的八成以上。當(dāng)前，甘薯已由主要的糧食作物轉(zhuǎn)變?yōu)橹饕米黠暳虾凸I(yè)原料。甘薯除含豐富的淀粉和糖類外，還含有豐富的蛋白質(zhì)。甘薯蛋白由于其獨特的營養(yǎng)價值和生理功能，目前正在被廣泛的研究。隨著甘薯在食品加工領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用，必將極大地推動甘薯的生產(chǎn)和加工。研究結(jié)果如下:
　　1.甘薯葉酸性磷酸酶的分離純化以新鮮甘薯老葉

3、為材料，經(jīng)過組織搗碎得勻漿、硫酸銨分級鹽析、DEAE-Sepharose層析、Superdex-200層析等步驟后，采用SDS-PAGE鑒定后，獲得了電泳純的ACP。純化后的酶的比活力約為251.49U/mg，純化了169.07倍，回收率約為3.5％。
　　2.甘薯葉酸性磷酸酶的性質(zhì)研究酶學(xué)性質(zhì)研究表明:該酶是單亞基酶，全酶相對分子質(zhì)量約為42.3kD，SDS-PAGE顯示單亞基相對分子質(zhì)量約為41.2kD。最適反應(yīng)溫度和pH分別

4、為65℃和5.2，在40℃以下和pH4.0～6.0范圍內(nèi)酶活較穩(wěn)定;以pNPP作底物時，該酶的Km值為0.258mmol/L;甲醇，EDTA和草酸對酶的抑制作用較大;Hg2+和Ag+對酶的抑制作用非常明顯。
　　3.甘薯葉酸性磷酸酶功能基團(tuán)的研究通過化學(xué)試劑對該酶的功能基團(tuán)進(jìn)行研究，結(jié)果表明:半胱氨酸的巰基、色氨酸的吲哚基和甲硫氨酸的硫醚基可能是酶的活性中心的必需基團(tuán);而酪氨酸酚羥基、賴氨酸的氨基、絲氨酸的羥基和二硫鍵可能對酶分子