鴨心蘋(píng)果酸脫氫酶的分離純化及性質(zhì)和功能基團(tuán)研究.pdf

1、蘋(píng)果酸脫氫酶(malatedehydrogenase，MDH)廣泛存在于動(dòng)物、植物以及微生物體內(nèi)，是生物體進(jìn)行糖代謝的關(guān)鍵酶之一，主要催化草酰乙酸和蘋(píng)果酸之間進(jìn)行可逆轉(zhuǎn)化。根據(jù)輔酶特異性，MDH可分為NAD-依賴(lài)型MDH(NAD-MDH)和NADP-依賴(lài)型MDH(NADP-MDH)。在真核細(xì)胞中，NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線(xiàn)粒體中，分別為c-MDH(cytosolicMDH)和m-MDH(mitochondrialMDH)，常以同型二

2、聚體形式存在。
　　 MDH廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、生物制藥、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、食品及發(fā)酵工業(yè)等領(lǐng)域。到目前為止，多種來(lái)源的MDH已得到了詳細(xì)研究，但未見(jiàn)家禽類(lèi)心臟中蘋(píng)果酸脫氫酶的研究報(bào)道。因此，本文以廉價(jià)、來(lái)源廣泛、容易獲得的鴨心為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)鴨心所含有的兩種MDH同工酶（c-MDH和m-MDH）進(jìn)行了分離純化，并對(duì)兩種同工酶進(jìn)行了部分酶學(xué)性質(zhì)研究，旨在為該酶的獲得提供一條新的途徑，為MDH同工酶的深入研究及應(yīng)用提供參考。其結(jié)果如下:

3、r>　　 1.鴨心蘋(píng)果酸脫氫酶的分離純化
　　 新鮮鴨心通過(guò)去血、勻漿粗提、硫酸銨沉淀、有機(jī)溶劑沉淀、DEAE-Sepharose離子交換層析以及Superdex-200凝膠過(guò)濾層析等常用方法，獲得了電泳純的鴨心c-MDH和m-MDH，其回收率分別為25.54％和10.98％，純化倍數(shù)分別為69.07倍和130.40倍，酶比活力分別為849.70U/mg和1604.19U/mg。
　　 2.鴨心蘋(píng)果酸脫氫酶的性質(zhì)研究<

4、br>　　 理化性質(zhì)研究表明:鴨心c-MDH和m-MDH全酶相對(duì)分子質(zhì)量均約為77.37kD、亞基相對(duì)分子質(zhì)量分別為39.58kD和37.62kD，因此可以判定兩種同工酶都是由2個(gè)相同亞基構(gòu)成;鴨心c-MDH和m-MDH的等電點(diǎn)分別為6.5和6.8、最適反應(yīng)溫度分別為55℃和65℃、最適反應(yīng)pH分別為7.2和7.5、對(duì)草酰乙酸的表觀(guān)Km值分別為140.93μmol/L和263.43μmol/L;兩者都在30℃以下時(shí)比較穩(wěn)定，都具有較強(qiáng)

5、的耐堿性。
　　 3.有機(jī)溶劑、化合物及金屬離子對(duì)鴨心蘋(píng)果酸脫氫酶的影響
　　 甲醇、乙醇、異丙醇、氯仿、抗壞血酸、草酸、EDTA二鈉（高濃度時(shí)）、SDS、Cu2+、Ag+以及(Pb)2-、Zn2-對(duì)鴨心c-MDH和m-MDH的活性都有很明顯的抑制作用;而Mg2+、K+、Ba2+對(duì)鴨心c-MDH和m-MDH的活性都表現(xiàn)出較強(qiáng)的激活作用;Ca2+對(duì)c-MDH基本上沒(méi)有影響，而對(duì)m-MDH具有很強(qiáng)的抑制作用。