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文檔簡(jiǎn)介
1、從白洋淀日本沼蝦肝胰腺中提取的堿性磷酸酶,經(jīng)正丁醇抽提、硫酸銨分級(jí)沉淀,0.15﹪NaCl溶液透析,得粗酶液.分別用SephadexG-200葡聚糖層析柱、CM-纖維素層析柱、DEAE-纖維素層析柱純化粗酶,結(jié)果表明DEAE-纖維素柱層析效果最好.以對(duì)硝基苯磷酸二鈉(PNPP)為底物,測(cè)定提純后酶的理化性質(zhì),結(jié)果表明:該酶的最適pH值為8.5,最適溫度為45℃,Km值為2.8×10<'-3>mol/L.Mg<'2+>、Mn<'2+>、Z
2、n<'2+>對(duì)酶有明顯的激活作用,而Cu<'2+>則表現(xiàn)出抑制作用.甲醛、乙醇、甲醇、Vc、草酸、酒石酸對(duì)堿性磷酸酶均有抑制作用.在一定條件下分別采用苯甲基磺酰氟(PMSF)、N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)、一氯乙酸、乙酰丙酮、巰基乙醇、甲醛等化學(xué)修飾劑選擇修飾日本沼蝦堿性磷酸酶的多種氨基酸殘基,并測(cè)定其酶活力變化.結(jié)果表明,巰基乙醇、甲醛、一氯乙酸能顯著抑制酶的活力,活力的下降與修飾劑的濃度相關(guān);PMSF也能抑制酶的活力,活力的下降與修
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