辛伐他汀對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖及堿性磷酸酶活性的影響.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。研究生簽名：氍瑩導(dǎo)師簽章：渺二級(jí)學(xué)院簽蘆J弓年弓河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)

2、創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：勘耋導(dǎo)師簽名：i蜴竅加f≥年弓月矽Et中文摘要辛伐他汀對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖及堿性磷酸奠活性的影響摘要目的：本試驗(yàn)采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法，探討辛伐他汀對(duì)體外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞(humandentalpulpcells，HDPCs)的細(xì)胞增殖、礦

3、化、細(xì)胞周期及堿性磷酸酶(ALP)活性的影響。方法：選擇年齡為1828歲新鮮拔除的健康、完整、無(wú)齲、無(wú)隱裂的恒牙或第三磨牙(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院口腔外科提供)。采用組織塊酶解法培養(yǎng)細(xì)胞。待細(xì)胞長(zhǎng)出后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況。細(xì)胞傳代成功后，取第4代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人牙髓細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞爬片，用SABC法進(jìn)行波形絲蛋白和角蛋白免疫組織化學(xué)染色，鑒定細(xì)胞來(lái)源。MTT比色法檢測(cè)辛伐他汀對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖能力的影響：1)選用第4代生長(zhǎng)良好的牙髓

4、細(xì)胞，制備lxl04／ml的細(xì)胞懸液，接種于96孔板，每孔100lxl。2)細(xì)胞長(zhǎng)滿孔底后，棄去孔中的培養(yǎng)液，用PBS浸洗細(xì)胞。3)實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組設(shè)5個(gè)孔。對(duì)照組：在有細(xì)胞的孔內(nèi)加入1501xl完全培養(yǎng)液(含2％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液)?？瞻讓?duì)照組：在無(wú)細(xì)胞的孔內(nèi)加入150“1的完全培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)組：在有細(xì)胞的孔內(nèi)分別加入150p1用完全培養(yǎng)液配制的終末濃度分別為lO。9mol／L，10。8mol／L，10

5、0n101／L和10。6mol／L的辛伐他汀溶液。4)分別培養(yǎng)至第ld、5d時(shí)，棄孔中培養(yǎng)液，以PBS沖洗，在所需檢測(cè)的培養(yǎng)孔內(nèi)每孔加入四甲基偶氮唑鹽(MAT)溶液(5mg／mL)20止，37。C下繼續(xù)孵育4h，終止培養(yǎng)，吸棄孔內(nèi)上清液，在每孔分別加入1001xL二甲基亞砜(DMSO)，室溫下輕微振蕩5min。以空白對(duì)照孔調(diào)零，選擇492nlil波長(zhǎng)，在酶標(biāo)儀上檢測(cè)各孔吸光度值(A)。檢測(cè)辛伐他汀對(duì)人牙髓細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性的影