山西省呂梁市幽門螺桿菌耐藥性的研究.pdf

1、本文研究目的：1.分析山西省呂梁市幽門螺桿菌臨床菌株對(duì)該市5種常用抗生素的耐藥率，以指導(dǎo)臨床用藥。2.通過(guò)對(duì)甲硝唑及克拉霉素耐藥機(jī)制的初步探討，為本市有關(guān)幽門螺桿菌耐藥菌株的分子機(jī)制方面的研究提供有用的資料。 研究方法： 1.將284例胃黏膜標(biāo)本采用盲涂法接種于含有10％綿羊血的哥倫比亞選擇性培養(yǎng)基上，倒置于厭氧玻璃罐中密封，并充入混合氣體(5％O<,2>，10％CO<,2>，85％N<,2>)，37℃、濕度98％以上，

2、培養(yǎng)3～5天，共分離培養(yǎng)成功的H.pylori菌株有104株，經(jīng)革蘭染色及生化反應(yīng)(包括快速尿素酶、過(guò)氧化氫、氧化酶試驗(yàn))鑒定后，保存于-80℃冰箱。 2.對(duì)原代生長(zhǎng)良好的81株H.pylori菌株進(jìn)行復(fù)蘇，傳代培養(yǎng)2～3代后，對(duì)本市臨床上常用的5種抗生素(甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、左氧氟沙星、呋喃唑酮)進(jìn)行紙片法藥敏實(shí)驗(yàn)，并采用E-test試紙條對(duì)部分克拉霉素耐藥和敏感的菌株進(jìn)行確認(rèn)。 3.篩選對(duì)甲硝唑耐藥的菌株15

3、株、敏感菌株10株及NCTC11637擴(kuò)增rdxA基因；以及對(duì)克拉霉素耐藥的菌株6株、敏感菌株10株及NCTC11637擴(kuò)增23SrRNA基因。 4.再分別從中篩選出部分甲硝唑和克拉霉素耐藥基因的PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，測(cè)序結(jié)果采用DNAStar軟件包進(jìn)行分析，探討耐藥菌株和敏感菌株耐藥基因的差異。 研究結(jié)果： 1.從284例胃黏膜標(biāo)本中共分離培養(yǎng)成功104株H.pylori臨床菌株，其培養(yǎng)陽(yáng)性率為36.6％(

4、104/284)。 2.81株H.pylori臨床菌株對(duì)5種抗生素耐藥率分別為：甲硝唑75.3％(61/81)；克拉霉素7.4％(6/81)；阿莫西林7.4％(6/81)；左氧氟沙星12.4％(10/81)；呋喃唑酮8.6％(7/81)。 3.H.pylori臨床菌株與H.pylori26695菌株比較rdxA基因序列的同源性，Mtz<'R>菌株為94.90％±1.17％， Mtz<'S>菌株為95.13％±0.575％

5、，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而H.pylori臨床菌株與H.pylori26695比較RdxA氨基酸序列的同源性，Mtz<'R>菌株為68.67％±14.67％，Mtz<'S>菌株為91.63％±3.96％，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.H.pylori臨床菌株與H.pyloriU27270比較23SrRNA基因序列的同源性，Clr<'R>菌株為97.25％±2.22％，Clr<'S>菌株為99.00％±0.28％，P>0

6、.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 研究結(jié)論： 1.本研究通過(guò)對(duì)二氧化碳培養(yǎng)箱(5％～10％CO<,2>)和厭氧玻璃罐充入混合氣體(5％O<,2>，10％CO<,2>，85％N<,2>)進(jìn)行兩種方法的對(duì)照培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)后者的培養(yǎng)陽(yáng)性率明顯高于前者，且更適合用于H.pylori臨床菌株的分離培養(yǎng)。 2.采用紙片法藥敏試驗(yàn)得出山西省呂梁市H.pylori臨床菌株對(duì)5種抗生素的耐藥率分別為：甲硝唑?yàn)?5.3％；克拉霉素為7.4％；阿莫