茶多酚,厚樸酚抑制早期人工根面齲作用的實驗研究.pdf

1、人口老齡化已經(jīng)成為當(dāng)今社會關(guān)注的重要問題,隨之而來的則主要是老年人的健康問題,由于牙體磨耗,牙齦萎縮導(dǎo)致的牙根暴露,口腔環(huán)境改變,衛(wèi)生狀況不佳等一系列因素的作用,使得老年人根面齲的發(fā)生率大大增加。雖然抗生素、氟化物等藥物在防齲方面取得了一定的效果,但其毒副作用卻也不可忽視,因此開發(fā)新的防齲藥物一直是國內(nèi)外學(xué)者的研究重點。茶多酚為茶葉中的抑菌活性成分,約占茶葉干重的25％,是一種高效低毒的自由基清除劑和抗氧化劑,不僅可以提高人體免疫力,延

2、緩衰老,降低血壓血脂,而且對變形鏈球菌的生長有很強(qiáng)的抑制作用。厚樸酚為厚樸的主要抑菌活性成分,不僅對心腦血管有保護(hù)作用而且有明顯的抗真菌和抑制口腔致病菌的作用。這兩種中藥是近年來研究較多的天然抗菌藥物,但其是否能有效的抑制根面齲的發(fā)生發(fā)展,以及它們與其他種類藥物療效的對比研究在國內(nèi)外研究還報道較少。
　　 目的:
　　 本文通過對比茶多酚、厚樸酚對早期人工根面齲的抑制作用,探討其防齲機(jī)制,為天然抗菌藥物在臨床的應(yīng)用與選擇

3、提供實驗基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　 方法:
　　 1預(yù)備離體牙
　　 收集60歲以上因牙周病松動Ⅲ°拔除的新鮮上頜磨牙40顆(體式顯微鏡下放大10倍觀察,根面無齲壞,無裂痕),刮除牙周膜和牙石,去離子水超聲蕩洗5min后于釉牙骨質(zhì)界處去除牙冠與牙髓組織,在腭側(cè)根面形成4×4×2mm3的牙骨質(zhì)塊,除根面(實驗區(qū))外其余部分涂布雙層耐酸指甲油保護(hù),將制備好的牙骨質(zhì)塊浸于10％的甲醛溶液中消毒備用。
　　 2菌液的制備

4、
　　 將復(fù)蘇48h的變形鏈球菌(國際標(biāo)準(zhǔn)菌株)于腦心浸液培養(yǎng)基(BHI)厭氧條件下[f(N2)=85％,Φ(CO2)=10％,Φ(H2)=5％]培養(yǎng),傳代三次后涂片,生化鑒定確定為變形鏈球菌后使用紫外分光光度計,用無菌生理鹽水將菌液調(diào)整為OD=1.0的懸濁液備用。
　　 3建立人工根面齲模型
　　 將消毒好的牙骨質(zhì)標(biāo)本置于人工唾液中37℃,24h,使之形成獲得性膜后再放于制備好的新鮮菌液中,每48h更換菌液20

5、d后隨機(jī)抽取牙體組織標(biāo)本觀察確定是否形成早期齲損。
　　 4藥物處理早期人工齲
　　 將形成早期齲損的牙體組織標(biāo)本隨機(jī)分到四組:2mg/ml茶多酚溶液組,6.3μg/ml厚樸酚溶液組,20mg/ml氟化鈉溶液組和去離子水組,每組8顆標(biāo)本。將牙體組織標(biāo)本分別置于上述四種藥液中處理,每天浸泡3次每次時間為5min,循環(huán)5d,其余時間均置于37℃人工唾液恒溫箱中。
　　 5鈣離子溶出量測定:
　　 將四組藥物分

6、別處理后的牙骨質(zhì)標(biāo)本再次放入新鮮菌液中48h,于4h,8h,12h,24h,48h五個時間點分別取兩毫升菌液用紫外分光光度計計算溶液中的鈣離子濃度。
　　 6掃描電子顯微鏡觀察
　　 將菌液中取出的牙骨質(zhì)塊經(jīng)0.1％PBS緩沖液漂洗三次后立即放入2.5％的戊二醛內(nèi)固定24h,1％鋨酸固定2h,再次放入0.1％PBS緩沖液漂洗三次,50％至無水乙醇逐級脫水干燥后鍍金膜,用掃描電鏡觀察開窗區(qū)的牙體組織表面結(jié)構(gòu)并拍照。

7、　　 7統(tǒng)計處理
　　 將不同菌液中的鈣離子溶出量使用SPSS13.0軟件進(jìn)行方差分析,組間比較用snk-q檢驗,顯著性標(biāo)準(zhǔn)a=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1鈣離子溶出量測定結(jié)果
　　 1.1四組菌液中的鈣離子溶出量均在脫礦8小時后均隨著時間的延長而增多。
　　 1.2在五個不同的時間點:0-8h:各組鈣離子溶出量無明顯差異,8-48:茶多酚組,氟化鈉組,厚樸酚組三組菌液中的鈣離子溶出量均較

8、去離子水組顯著減少(P＜0.05),兩兩比較后得出茶多酚組和氟化鈉組抑齲效果無明顯差別(p＞0.05),厚樸酚抑齲效果較差(p＜0.05)。
　　 2掃描電鏡觀察空白對照組:可見牙體表面粘附大量的細(xì)菌,牙體組織脫礦后形成大小不等的孔隙,陷窩;陷窩內(nèi)可見聚集的細(xì)菌團(tuán)塊。
　　 氟化鈉組:牙體組織表面細(xì)菌較對照組明顯減少,仍可看見牙骨質(zhì)表面板層結(jié)構(gòu),有些牙體組織破壞形成的陷窩表面可以看見礦物質(zhì)的再沉積。
　　 茶多酚

9、組:牙體組織結(jié)構(gòu)比較完整,裂隙周圍可見散在的細(xì)菌。
　　 厚樸酚組:牙體表面細(xì)菌較對照組減少,牙體組織結(jié)構(gòu)破壞比較明顯,牙體表面結(jié)構(gòu)紊亂,牙骨質(zhì)小管結(jié)構(gòu)呈斑塊孔隙和裂隙。
　　 結(jié)論:
　　 1牙體組織隨著放入菌液后時間的延長,鈣離子溶出量增多。
　　 2茶多酚,厚樸酚均可以在一定程度上抑制早期根面齲的發(fā)展,但是茶多酚抑制根面齲的作用效果較好。
　　 3藥物處理后的牙體組織表面結(jié)構(gòu)與對照組存在差異