塞來昔布對體外幽門螺桿菌誘導(dǎo)GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞抑制作用的研究.pdf

1、目的:
　　 體外培養(yǎng)幽門螺桿菌(Hp)誘導(dǎo)人永生性胃上皮細(xì)胞株(GES-1)轉(zhuǎn)化細(xì)胞;研究選擇性環(huán)氧合酶2（COX-2）抑制劑塞來昔布對Hp誘導(dǎo)的GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞是否具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用，為塞來昔布應(yīng)用于胃癌的預(yù)防提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、在體外將幽門螺桿菌悉尼株(SS1)與GES-1細(xì)胞按1∶1共培養(yǎng)2個月，用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法、平板克隆形成實驗檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)化情況，培養(yǎng)

2、GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞;
　　 2、用不同濃度(0，25，50，75，100，125，150μmol/L)的塞來昔布作用于GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞24h，48h，72h，MTT法篩選合適濃度范圍并檢測其對GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖能力的影響，用合適濃度范圍內(nèi)不同濃度的塞來昔布作用于GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞后，分別利用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測Ki-67、Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測細(xì)胞凋亡率觀察塞來昔布對GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞的增殖及凋亡的影

3、響。
　　 結(jié)果:
　　 1、相差顯微鏡下，GES-1細(xì)胞與Hp(SS1)共同培養(yǎng)2個月后細(xì)胞出現(xiàn)形態(tài)學(xué)變化，表現(xiàn)為細(xì)胞大小不等，形狀不規(guī)則，細(xì)胞體積增大，偶見巨細(xì)胞，形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞核增大，核仁增多，出現(xiàn)病理核分裂象，也可見少量漂浮細(xì)胞，我們稱之為GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞。
　　 2、MTT法檢測GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞24h、48h、72h的OD值分別為0.255±0.006，0.347±0.078，0.727±0.09

4、6，均高于GES-1對照細(xì)胞(0.225±0.014，0.245±0.041，0.490±0.046)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3、GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞克隆形成數(shù)(52.67±10.29)及克隆形成率(26.3％)均高于GES-1對照細(xì)胞(27.17±8.47，13.6％)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.687，P=0.001)。
　　 4、用不同濃度(0，25，50，75，100，125，150μmol/L)的塞來昔布作

5、用于GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞24h，48h，72h，MTT法篩選顯示:作用時間為24h時塞來昔布合適濃度范圍在[75，100]μmol/L，作用時間為48h時塞來昔布合適濃度范圍在[50，100]μmol/L，作用時間為72h時塞來昔布合適濃度范圍在[25，100]μmol/L，且隨著塞來昔布濃度(50、75、100μmol/L)的增加，塞來昔布對轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖的抑制率升高，呈劑量依賴性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 5、終濃度分別為0、5

6、0、75、100μmol/L的塞來昔布作用于GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞48h后，用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測其Ki-67表達(dá)量逐漸減少，分別為(13.374±2.084)％,(9.974±2.169)％,(7.014±2.328)％,(3.907±1.896)％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 6、終濃度分別為0、50、75、100μmol/L的塞來昔布作用于GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞48h后，Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測細(xì)

7、胞凋亡率逐漸增高，分別為(5.242±2.139)％,(23.098±9.436)％,(39.616±12.405)％,(64.342±8.403)％,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、幽門螺桿菌長期作用于胃上皮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)會發(fā)生改變，出現(xiàn)增殖能力增強(qiáng)，并可以誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)化。
　　 2、塞來昔布可抑制GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)其凋亡，并具有濃度依賴性，揭示了塞來昔布對GES-1轉(zhuǎn)化細(xì)