塞來(lái)昔布對(duì)嘌呤氨基核苷誘導(dǎo)的足突細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：足細(xì)胞即腎小球臟層上皮細(xì)胞，是腎小球?yàn)V過(guò)屏障的重要組成部分。成熟足細(xì)胞是一種具有高度特異性且終級(jí)分化的細(xì)胞，不具有增殖特性，所以一旦丟失很難修復(fù)。大量研究表明足細(xì)胞損傷，脫落或凋亡是腎小球硬化起始和進(jìn)展的主要原因。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明特異性環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑對(duì)許多慢性腎臟疾病有減輕蛋白尿，延緩腎損害進(jìn)展的作用，但作用機(jī)制尚未完全闡明。本研究旨在通過(guò)特異性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布(Celecoxib)對(duì)嘌呤氨基核苷(PA)誘

2、導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)一步探討特異性COX-2抑制劑對(duì)足細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制，為臨床對(duì)慢性進(jìn)行性腎損害的防治探索出新的治療靶點(diǎn)。 方法： 1.將體外培養(yǎng)的條件永生性小鼠足細(xì)胞復(fù)蘇并傳代培養(yǎng)，采用Western blot法分析COX-2在足細(xì)胞中的表達(dá)。為進(jìn)一步研究特異性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)嘌呤氨基核苷誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡的影響建立實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2.以條件永生性小鼠足細(xì)胞株為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)分為6組：正常對(duì)照組(CO

3、N)、嘌呤霉素氨基核苷組(PA)、地塞米松組(DEX)、塞來(lái)昔布組(CELE)、地塞米松+嘌呤氨基核苷組(DEX+PA)、塞來(lái)昔布+嘌呤氨基核苷組(CELE+PA)。分別在0、8、24和48h應(yīng)用Hoechst33258熒光染色法觀察足細(xì)胞的凋亡水平，并在上述時(shí)間點(diǎn)用Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)Caspase-3蛋白酶活性水平。在24h，用Western blot技術(shù)檢測(cè)各組P53及COX-2水平。 結(jié)果： 1.

4、在33℃增殖狀態(tài)下，足細(xì)胞呈鵝卵石狀，在37℃分化狀態(tài)下的足細(xì)胞呈分叉狀。正常足細(xì)胞在33℃表達(dá)COX-2，在37℃分化14d后，用低血清培養(yǎng)液培養(yǎng)后，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，COX-2表達(dá)逐漸增多，24h達(dá)最高，以后再逐漸減少。 2.與正常對(duì)照組相比較，DEX、CELE組凋亡率無(wú)明顯變化(P>0.05)，PA組凋亡率明顯增高(P<0.001)，DEX+PA、CELE+PA組凋亡率較PA組明顯下降(P<0.05)。 3.各組Cas

5、pase-3活性無(wú)明顯差異(P>0.05)。 4.24h時(shí)，PA組P53表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增多，用DEX、CELE干預(yù)后其表達(dá)明顯降低(P<0.05)。 5.正常對(duì)照組即可表達(dá)COX-2，用PA誘導(dǎo)24h，COX-2表達(dá)明顯增加，用DEX、CELE干預(yù)后COX-2表達(dá)水平有所減少(P<0.05)。 結(jié)論： 1.COX-2在足細(xì)胞上的表達(dá)呈時(shí)間依賴性。 2.塞來(lái)昔布可以抑制PA誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡，P