選擇性COX-2抑制劑塞來昔布對人子宮內(nèi)膜腺癌細胞HEC-1-B生長抑制作用的研究.pdf

1、本研究即是在子宮內(nèi)膜癌便改變組織中COX-2呈高表達的研究基礎(chǔ)之上,利用體外培養(yǎng)的方法,用不同濃度的選擇性COX-2抑制劑塞來昔布作用于人子宮內(nèi)膜腺癌細胞相同時間后或在同一藥物濃度下作用不同時間的條件下,從不同水平觀察該藥物對細胞的增殖和凋亡的影響,從而為臨床藥物治療早期子宮內(nèi)膜癌的可能性提供一定的實驗依據(jù)。 材料與方法: 本研究中采用的細胞為人子宮內(nèi)膜腺癌細胞HEC-1-B。將該細胞體外培養(yǎng)后,分別用0 μm/L,6.

2、25 μm/L,12.5 μm/L,25 μm/L,50 μm/L,100 μm/L藥物濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)24、48、72小時后,采用以下方法觀察藥物作用效果。 包括：(1)細胞貼壁,免疫組織化學SP法檢測HEC-1-B細胞中COX-2蛋白的表達；(2)MTT法檢測各藥物濃度作用相同時間及相同藥物濃度作用不同時間之后的各組細胞抑制率；(3)倒置相差顯微鏡觀察藥物作用一定時間前后細胞的形態(tài)學變化；(4)流式細胞術(shù)檢測細胞周期及凋亡率

3、；(5)RT-PCR法檢測不同藥物濃度作用后COX-2 mRNA表達的變化情況。 結(jié)果： 1、免疫組織化學法檢測人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系HEC-1-B中COX-2蛋白表達陽性,可以進行如下實驗； 2、MTT法檢測可見隨著藥物濃度增加,活細胞數(shù)逐漸減少,抑制率增高,同時,同一藥物濃度作用時間越長,對細胞的抑制作用也越明顯； 3、藥物作用一定時間后,利用倒置相差顯微鏡觀察可見細胞密度明顯降低,細胞體積縮小,胞體變

4、圓,細胞間隙明顯增大,胞內(nèi)可見明顯的空泡結(jié)構(gòu)； 4、流式細胞術(shù)檢測可見藥物作用后細胞發(fā)生G2/M期阻滯,隨著藥物作用時間延長,G2/M期的細胞逐漸增加,細胞凋亡率增高； 5、RT-PCR檢測可見隨著藥物濃度增加,COX-2 mRNA的表達逐漸下降。 結(jié)論: 1、人子宮內(nèi)膜細胞系HEC-1-B中COX-2呈陽性表達； 2、塞來昔布可以有效的使細胞中的COX-2mRNA的表達下調(diào)； 3、塞來昔