胃癌患者外周血N——糖特征性改變及其與胃癌證型相關(guān)性研究.pdf

1、目的:分析胃癌患者、萎縮性胃炎患者及健康對照者外周血N-糖組特征性改變，建立胃癌N-糖診斷模型;將外周血N-糖組檢測初步應(yīng)用于臨床，初步探索胃癌患者N-糖組特征性改變機制;分析胃癌患者證型與胃癌分期、胃癌常用腫瘤標志物水平及N-糖組改變的關(guān)系。
　　 方法:采集128例胃癌患者、108例萎縮性胃炎患者及120例健康對照者外周血，應(yīng)用基于DNA測序儀的熒光糖電泳(DSA-FACE)法檢測并比對其血清N-糖組;基于N-糖檢測數(shù)據(jù)，使

2、用logistic回歸法分別建立用于鑒別胃癌患者及健康對照者，胃癌與萎縮性胃炎患者的N-糖診斷模型，使用ROC曲線評價模型的診斷效力。將建立的N-糖診斷模型及N-糖特征性改變，初步應(yīng)用于臨床:另行收錄健康對照者、萎縮性胃炎患者及胃癌患者各20例，形成臨床評價組，驗證診斷模型診斷效力;比較不同分期胃癌患者外周血N-糖組的改變，分析胃癌分期與胃癌標志物的相關(guān)性;抽取20例胃癌根治術(shù)患者，組成手術(shù)前后對照組，隨訪并比較其根治術(shù)前后血清N-糖組

3、的改變。抽取健康對照者、萎縮性胃炎患者及胃癌患者各20例，形成機制研究組用于研究胃癌患者外周血N-糖組特征性改變的機制:應(yīng)用健康對照者、萎縮性胃炎患者及胃癌患者這三組患者血清及胃癌患者手術(shù)組織標本，使用Lectin-blotting法檢測并比較三組患者血清核心巖藻糖蛋白水平，比較癌與癌旁組織核心巖藻糖蛋白表達水平;應(yīng)用RT-PCR方法比較癌與癌旁組織核心巖藻糖基化轉(zhuǎn)移酶Fut8 mRNA及糖基轉(zhuǎn)運因子GDP-fuc-TrmRNA的表達水

4、平，以初步探索胃癌患者外周血特征性N-糖組改變的機制。分析胃癌患者分期及證型的相關(guān)性，比較不同證型患者外周血常用胃癌標志物水平及N-糖組變化的差異。
　　 結(jié)果:胃癌患者、萎縮性胃炎患者及健康對照者，檢測三組患者外周血N-糖組，發(fā)現(xiàn)Peak1、3、5、6、7、9及總核心巖藻糖水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中Peak1、9峰值在健康對照組最低，在胃癌組最高，Peak6峰值在健康對照組最高，在胃癌組最低，呈趨勢性改變;建立用于鑒別胃癌患者

5、及正常對照者的N-糖診斷模型:GCglyco A(GCglyco A=-16.357+0.105Peak5+0.570Peak6+0.319Peak8-0.532Peak9)以及鑒別胃癌與萎縮性胃炎患者的N-糖診斷模型:GCglyco B(GCglyco B=-1.139+0.368Peak3-1.151 Peak4+0.333Peak6-0.306Peak9);應(yīng)用ROC曲線測試GCglyco A的ROC曲線下面積(AUC)為0.90

6、3，高于CEA(0.767)、CA19-9(0.779)、CA125(0.772)以及CA724(0.714)，測試GCglyco B的ROC曲線下面積(AUC)為0.847，高于CEA(0.618)、CA19-9(0.610)、CA125(0.640)以及CA724(0.606);用于鑒別胃癌患者與健康對照者，GCglyco A比CEA具有更高的敏感度及準確率(78.13％，84.68％ vs46.09％，70.16％)，但特異度較低

7、(91.67％ vs95.83％)，用于鑒別胃癌患者及萎縮性胃炎患者，GCglyco B亦比CEA具有更高的敏感度及準確率(67.19％，76.27％ vs46.09％，58.90％)，但特異度較低(74.07％ vs87.03％)。胃癌患者、萎縮性胃炎患者及健康對照者三組間GCglyco A及GCglyco B值差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義，GCglyco A值在健康對照組最高，在胃癌組最低，呈趨勢性改變。應(yīng)用臨床評價組數(shù)據(jù)驗證N-糖診斷模型

8、的診斷效力，證實GCglyco A及GCglyco B與CEA、CA19-9、CA125以及CA724相比有更高的敏感度與準確率，但特異度較低;比較128例胃癌患者中不同分期胃癌患者外周血N-糖組，發(fā)現(xiàn)不同分期患者的Peak6、Peak9、總核心巖藻糖（Sumfuc）、GCglycoA、GCglyco B值差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，其中Peak6峰值及GCglyco A值在Ⅰ期患者最高，隨腫瘤分期的增加，值不斷下降，至Ⅳ期達到最低，而Peak

9、9峰值在Ⅰ期患者最低，隨腫瘤分期增加而變大，至Ⅳ期達到最高，呈現(xiàn)趨勢性變化;相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)Peak6、GCglyco A、GCglyco B值與腫瘤分期呈負相關(guān)，Peak9峰值與腫瘤分期呈正相關(guān);比較20例胃癌根治術(shù)患者手術(shù)前后外周血N-糖譜的變化，發(fā)現(xiàn)Peak1、Peak4、GCglyco A及GCglyco B值在手術(shù)前后差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，術(shù)后Peak1、Peak4峰值下降，GCglyco A及GCglyco B值出現(xiàn)了上升;檢測

10、并比較健康對照者、萎縮性胃炎患者及胃癌患者外周血LAC結(jié)合的核心巖藻糖蛋白水平，結(jié)果胃癌患者外周血中LCA結(jié)合的核心巖藻糖蛋白水平低于萎縮性胃炎和正常對照組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，檢測并比較20例胃癌患者手術(shù)組織標本中癌組織及癌旁組織中LAC結(jié)合的核心巖藻糖蛋白水平、Fut8mRNA及GDP-fuc-Tr mRNA表達水平，結(jié)果癌組織中核心巖藻糖水平低于癌旁組織，但差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，癌組織Fut8 mRNA表達水平低于癌旁組織，差異

11、具有統(tǒng)計學(xué)意義，而癌組織與癌旁組織GDP-fuc-TrmRNA表達水平差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。將128例胃癌患者分為肝胃不和型、瘀毒內(nèi)阻型、痰濕凝結(jié)型、脾胃虛寒型、胃熱傷陰型及氣血雙虧型六型，分析胃癌患者證型在不同腫瘤分期的分布情況，應(yīng)用卡方檢驗，結(jié)果提示不同胃癌分期間胃癌證型分布存在差異，Ⅰ期、Ⅱ期患者以肝胃不和型較多，分別占50％及34.62％，Ⅲ期患者以痰濕凝結(jié)型、胃熱傷陰型及脾胃虛寒型較多，分別占23.73％、20.34％及20.

12、34％，Ⅳ期患者以氣血雙虧型及瘀毒內(nèi)阻型較多，分別占30.43％及26.09％;比較不同胃癌證型患者血清CEA、CA19-9、CA125及CA724水平，發(fā)現(xiàn)各證型組間CA724水平存在差異，胃熱傷陰組最高，與瘀毒內(nèi)阻型、痰濕凝結(jié)型、脾胃虛寒型及氣血雙虧型組比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，痰濕凝結(jié)組最低，與其他各證型組比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義;比較不同胃癌證型患者外周血N-糖組，發(fā)現(xiàn)Peak1、6峰值及GCglyco A值在不同證型間差異具有統(tǒng)計學(xué)意

13、義，Peak1峰值在氣血雙虧型患者最高，與肝胃不和型、胃熱傷陰型及脾胃虛寒型相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，肝胃不和型最低，與胃熱傷陰型、痰濕凝結(jié)型、瘀毒內(nèi)阻型及氣血雙虧型比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;Peak6峰值在肝胃不和型患者最高，與胃熱傷陰型、痰濕凝結(jié)型、瘀毒內(nèi)阻型及氣血雙虧型比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，氣血雙虧型最低，與脾胃虛寒型比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;GCglyco A值在氣血雙虧型患者最低，與肝胃不和、胃熱傷陰及脾胃虛寒型比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，肝

14、胃不和型最高，與痰濕凝結(jié)型、瘀毒內(nèi)阻型及氣血雙虧型比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:胃癌患者外周血N-糖組與正常對照者及萎縮性胃炎患者相比，存在特征性改變，外周血N-糖組檢測有應(yīng)用于胃癌篩選的潛力;不同分期胃癌患者及胃癌患者手術(shù)前后外周血N-糖組均有特征性改變，胃癌患者外周血核心巖藻糖蛋白水平的降低可能與腫瘤組織中核心巖藻糖基化轉(zhuǎn)移酶Fut8水平下降有關(guān);胃癌證型分布與腫瘤分期相關(guān)，胃癌證型與部分血清腫瘤標志物及外周血N-糖組