羅哌卡因-醋酸地塞米松聚乳酸羥基乙酸共聚物微球藥效學和藥動學的觀察.pdf

1、研究背景和目的：
　　 術后疼痛是在圍手術期治療過程中的一個重要問題。注射局部麻醉藥是治療術后疼痛最直接、有效的鎮(zhèn)痛方法。局部麻醉藥可逆性地阻滯應用或注射局部神經(jīng)的傳導而使機體某個特定區(qū)域產(chǎn)生暫時性的感覺喪失,但臨床上所應用的水溶性局麻藥不可能通過單次注射達到長時間的鎮(zhèn)痛要求。目前時效最長的水溶性局麻藥一次給藥后的鎮(zhèn)痛時間不超過12小時。臨床上常采用間斷注射局麻藥或通過體內(nèi)導管植入持續(xù)給藥等方式達到長時間的鎮(zhèn)痛要求,但卻需要比較

2、昂貴的設備及連續(xù)監(jiān)護。給藥次數(shù)過多可引起藥物累積可導致呼吸及循環(huán)的抑制,有可能引起局麻藥中毒；長時間留置導管容易引起感染或導管移位及打折,所以這些方法并不是解決長時間鎮(zhèn)痛的最好途徑。缺乏有效的長時間的鎮(zhèn)痛治療方法突顯在疼痛治療領域新的治療方法的必要性。微型成球技術是近 40年來應用于藥物制劑領域的一項新技術,其特點是利用天然的或合成的高分子聚合物作為藥物控制釋放的載體包裹藥物,通過使藥物緩慢釋放,以達到延長藥物作用時間的目的。目前緩釋微

3、球已運用于抗癌藥、抗生素、眼部疾病、基因治療及糖尿病治療等多方面的研究。
　　 有關 PLA 和PLGA 微球應用于局部麻醉藥的研究大約有三十年歷史。早在1981 年,Wakiyama N 制備了包含幾種局麻藥的PLA 微球,1994 年 Le Corre 等研究了布比卡因 PLA 和PLGA 微球的制備和體外釋藥特性,均證明以生物降解材料包裹布比卡因制備局部麻醉藥微球緩釋制劑是可行的并且可顯著延長局麻藥作用時效。九十年代,Je

4、an,MM,Fletcher D,Passcal LC,Jean PE 等多位學者以不同動物為實驗對象研究布比卡因緩釋微球的藥代動力學和藥效動力學特性,結果顯示布比卡因緩釋微球可以顯著延長單次給藥鎮(zhèn)痛作用時間,并明顯降低體內(nèi)藥物濃度的波動。1996 年 Joanne C,1998 年 Christiane D 等人含有少量地塞米松的局部麻醉藥微球可在普通布比卡因微球的基礎上進一步延長了局部麻醉藥鎮(zhèn)痛作用時間。但至今為止國內(nèi)處仍無關于羅哌

5、卡因緩釋微球方面的研究報道。羅哌卡因結構、性質和代謝途徑與布比卡因相似,但卻具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和心血管系統(tǒng)毒性低的特點,更為突出的是羅哌卡因具有高度的感覺-運動神經(jīng)阻滯分離特性,增加了病人可迅速恢復運動的可能性,更適合用于術后鎮(zhèn)痛、晚期癌痛及三叉神經(jīng)痛等頑固性疼痛的治療,將其制備成 PLGA緩釋微球應用于鎮(zhèn)痛領域具有非常深遠的研究價值。
　　 基于以上因為,我們課題組前期研究了羅哌卡因 PLGA 緩釋微球的制備和體內(nèi)外釋

6、放的特點,動物實驗表明以新型長效局部麻醉藥羅哌卡因包裹藥物,以 PLGA 為載體制備緩釋微球是可行的,且具有顯著緩釋作用。本實驗的目的采用 W/O/W 復乳方法制備羅哌卡因-地塞米松 PLGA 緩釋微球,通過將羅哌卡因-醋酸地塞米松聚乳酸羥基乙酸共聚物微球植入小鼠坐骨神經(jīng)旁的熱痛阻滯時效和小鼠體內(nèi)血藥濃度的觀察,考查羅哌卡因-醋酸地塞米松聚乳酸羥基乙酸共聚物微球的藥代動力學和藥效動力學特點。
　　 研究方法
　　 1.R

7、op-Dex-PLGA-MS的制備:
　　 采用 W1/o/W2 雙重乳化-溶劑揮發(fā)法制備羅哌卡因加或不加醋酸地塞米松PLGA 微球,即(1)精密稱取一定量的羅哌卡因和醋酸地塞米松(加時)分別用雙蒸水和甲醇溶解作為內(nèi)水相;(2)另取適量的PLGA和乳化劑溶于二氯甲烷作為有機相,然后將(1)與(2)混合,用高速分散均質機均質 90s,制成初乳；(3)再將初乳用注射器移入外水相 PVA 水溶液中用高速分散均質機均質 90s,制得復乳

8、；(4)將復乳放在恒溫磁力攪拌器上持續(xù)攪拌離心、過濾、雙蒸水洗滌三次,收集微球,真空冷凍干燥,儲存在溫度為 4℃的干燥器中待用,高效液相色譜法(HPLC)檢測 Rop-PLGA-MS 和Rop-Dex-PLGA-MS 羅哌卡因或(和)地塞米松含量。
　　 2.動物準備和分組 昆明小鼠 165 只,平均體質量(30±1.231)g,禁食12 h,自由飲水,隨機分成為 3 組:羅哌卡因-地塞米松微球組(A 組,n=55)、羅哌卡因微

9、球組(B組,n=55)、空白微球組(C組,n=55)；每組又按植入微球后 0.5、1、2、4、8、16、24、36、48、72、96 h時間點分為 11 組(n=5)。
　　 3.給藥方法與標本采集
　　 小鼠麻醉后各組分別在坐骨神經(jīng)周圍的肌肉間隙中植入空白微球、羅哌卡因微球和羅哌卡因-地塞米松微球 400 mg.kg-1,每組按植入微球后0.5、1、2、4、8、16、24、36、48、72、96 h時間點熱踏板法測定小

10、鼠舔后足反應潛伏時間,每個時間點測定5只小鼠,每只小鼠測定5次,每次間隔 5 min。小鼠在各時間點熱踏板法測定結束后立即摘眼球取血得大約0.8～1.0 ml,0.1ml 1/2000肝素抗凝,3500 r/min 離心 8 min,提取血漿 0.5 ml,-20℃ 保存,以待高效液相色譜儀檢測(HPLC)。
　　 4.標本檢測和參數(shù)分析
　　 高效液相色譜條件 色譜柱:Shimpack VP-ODS 250×4.6 m

11、m 柱溫:室溫;流動相:甲醇:乙腈:水(20mMNaH2PO4,pH=4.6)=18:26:56(V:V:V),流速1.0 ml.min-1；檢測波長:Ropivacaine 和Bupivacaine 為 210 nm；Dexamethasone的檢測波長為 240 nm；內(nèi)標液:布比卡因；定量方法:外標法。進樣量 20 ul,最低檢測限 0.010 ug.ml-1。WinNonlin3P87DAS2.1.1 軟件行藥代動力學參數(shù)分析計

12、算兩組羅哌卡因微球的血藥動力學參數(shù)曲線下面積(AUC)、峰濃度(Cmax)、峰濃度時間(Tmax)、消除半衰期時間(t1/2)。
　　 5.統(tǒng)計學分析
　　 所有實驗資料采用SPSS13.0 軟件和Origin6.0 圖象軟件進行統(tǒng)計學分析和作圖,微球藥效學和血藥濃度數(shù)據(jù)比較采用隨機單位組析因因素方法分析,兩微球組血藥不同時間點上用兩樣本 t 檢驗；WinNonlin3P87DAS2.1.1 軟件進行藥代動力學參數(shù)分析,

13、P <0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果
　　 1.通過 W1/O/W2 制備羅哌卡因-醋酸地塞米松 PLGA 和羅哌卡因 PLGA 微球性質穩(wěn)定,重復性好。羅哌卡因載藥量(7.60±0.08)％,包封率(74.10±1.42)％；醋酸地塞米松載藥量(1.54±0.02)％,包封率(60.16±1.55)％。
　　 2.藥效學結果:羅哌卡因-地塞米松 PLGA 微球組(Rop-Dex-PLGA-MS、羅哌

14、卡因 PLGA 微球組(Rop-PLGA-MS)和空白微球(PLGA-MS)之間不同時點的小鼠潛伏時間均有統(tǒng)計學差異(P<0.001),各微球組和時間點之間均有交互作用(P=0.000)。2小時、4小時、8小時、12小時、24小時、36小時、48小時、72小時,羅哌卡因-地塞米松PLGA微球組與空白 PLGA 微球組有顯著性差異(P<0.001)；2小時、4小時、8小時、12小時、24小時、36小時,羅哌卡因 PLGA微球組(Rop-P

15、LGA-MS)與空白微球有顯著性差異(P<0.001)；48小時和72小時羅哌卡因-地塞米松微球與羅哌卡因微球組有差異顯著性(P<0.001)。
　　 3.藥代學結果:羅哌卡因-地塞米松 PLGA 微球組(Rop-Dex-PLGA-Ms)和羅哌卡因 PLGA 微球組(Rop-PLGA-Ms)血藥濃度不同時點均有統(tǒng)計學差異(P<0.001)。兩組微球羅哌卡因藥代學參數(shù) Cmax、Tmax、AUC、MRT、t1/2 分別為 117.

16、8和119.8 ng.ml-1,24 和12 h,8793.2和6861.15 ng.h.ml-1,43.7491 和38.7743 h,65.799和46.166 h。A、B、C 三組均未測到地塞米松血藥濃度數(shù)據(jù),C 組羅哌卡因和地塞米松血藥濃度均未測到。
　　 結論
　　 1.以PLGA 為載體材料,采用W/O/W乳劑.擴散溶劑揮發(fā)法制備 Rop-PLGA-MS和Rop-Dex-PLGA-MS是可行的。
　　

17、 2.藥效動力學的研究表明:(1)載體材料 PLGA 無鎮(zhèn)痛作用；(2)Rop-Dex-PLGA-MS 和Rop-PLGA-MS 兩組微球運動阻滯效果不明顯；(3)Rop-Dex-PLGA-MS 感覺阻滯時間為72小時較 Rop-PLGA-MS 阻滯時間36小時顯著延長,羅哌卡因聚乳酸-羥基乙酸微球中包入地塞米松可顯著延長羅哌卡因的麻醉鎮(zhèn)痛作用。
　　 3.藥代動力學的研究表明:Rop-Dex-PLGA-MS與Rop-PLGA-