黃芩苷聚乳酸羥基乙酸共聚物微球的制備及其體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：黃芩苷（Baicalin，BC）是從唇形科植物黃芩的干燥根中分離提取得到的黃酮類化合物。黃芩苷分子式為C21H18O11，化學(xué)名是5,6-二羥基-7-O-葡萄糖醛酸黃酮苷。藥理作用強(qiáng)且復(fù)雜廣泛，包括抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、清除自由基抗氧化、解熱、降壓、鎮(zhèn)靜、抗心律失常、免疫調(diào)節(jié)、抗變態(tài)反應(yīng)、對缺血-再灌注損傷的保護(hù)、神經(jīng)保護(hù)、抑制血管生成、調(diào)節(jié)血脂、抗動脈粥樣硬化、抗高血糖、抗內(nèi)毒素休克、抗 HIV等。臨床上用于用于傳染性肝炎、

2、急性膽道感染、鉛中毒、上呼吸道感染、肺熱、黃疸、腸炎痢疾、角膜炎等。由于黃芩苷水溶性和脂溶性都較低，在堿性條件下易分解穩(wěn)定性差；口服吸收不好，須經(jīng)腸道水解為黃芩素才可吸收；靜脈注射給藥毒性較口服大，半衰期短等短板限制了黃芩苷的臨床應(yīng)用。因此，本課題擬將其用高分子材料包封黃芩苷制成可降解緩釋微球，以增加藥物穩(wěn)定性，延長藥物體內(nèi)半衰期，減少用藥頻率，降低毒副作用使患者順應(yīng)性提高，為黃芩苷新型制劑研發(fā)提供參考。
　　方法：首先建立高效液

3、相色譜法法測定微球中黃芩苷的含量。以O(shè)/W乳化溶劑揮發(fā)法制備黃芩苷聚乳酸羥基乙酸共聚物（Poly lactic-co-glycolic acid，PLGA）微球，通過單因素試驗(yàn)考察了油相加入方式、水浴溫度、攪拌速度、揮發(fā)時(shí)間、分散劑種類和用量、有機(jī)溶出和油水相比、PLGA濃度、投藥量、反應(yīng)體系總體積等工藝和處方因素。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果選擇了對微球性質(zhì)影響較大的因素以包封率、載藥量和粒徑為評價(jià)指標(biāo)采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)一步優(yōu)化工藝處方，并考察優(yōu)化微

4、球的粒徑、載藥量、包封率、重現(xiàn)性。建立高效液相色譜法測定釋放介質(zhì)中黃芩苷的濃度。采用動態(tài)透析法考察黃芩苷PLGA微球的體外釋放特性，根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制釋放曲線并以零級、一級、Higuchi、weibull及 Ritger-peppas模型進(jìn)行釋放方程擬合以闡明微球中藥物釋放機(jī)制。建立高效液相色譜法測定血漿中黃芩苷的濃度。取SD大鼠隨機(jī)分為兩組，分別以10.5mg·kg-1的劑量尾靜脈注射黃芩苷及其PLGA微球混懸液，固定時(shí)間點(diǎn)取血測定血漿

5、中藥物濃度，繪制藥時(shí)曲線，進(jìn)行房室擬合并計(jì)算相關(guān)動力學(xué)參數(shù)。將黃芩苷PLGA微球置于高溫、高濕以及強(qiáng)光照射條件下進(jìn)行影響因素試驗(yàn)，進(jìn)行加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)以考察黃芩苷 PLGA微球的長期穩(wěn)定性。
　　結(jié)果：建立了高效液相色譜法測定微球中黃芩苷的含量，方法準(zhǔn)確度好，精密度高，滿足測定要求。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果初選的黃芩苷 PLGA微球制備處方工藝為：反應(yīng)溫度20℃；油相以玻璃注射器注入水相；機(jī)械攪拌速度為1000轉(zhuǎn)；溶劑揮發(fā)時(shí)間為2h；

6、分散劑為明膠；二氯甲烷作為油相。對載體材料PLGA濃度、投藥量、油水相之比和水相分散劑明膠的濃度四個(gè)因素用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)以優(yōu)化制備工藝，優(yōu)化結(jié)果為6％PLGA、1.5%明膠、60mg黃芩苷、水油相比1:10。按優(yōu)化條件制備3批黃芩苷PLGA微球，得到的優(yōu)化處方黃芩苷 PLGA微球平均粒徑、載藥量、包封率和綜合評分分別為：1.89μm、12.79%、85.40%和35.92。所得優(yōu)化處方微球的外觀、形態(tài)、粒徑：微球?yàn)榈S色粉末，表面

7、光滑無褶皺，球形較好，分散較好，流動性良好。體外釋放研究建立了高效液相色譜法測定釋放介質(zhì)中黃芩苷的濃度，方法準(zhǔn)確度好，精密度高，滿足測定要求。在37℃條件下，黃芩苷溶液在3h釋放91.58%，黃芩苷PLGA微球在前24h內(nèi)釋放32.20%，之后釋藥放緩，在11d內(nèi)累計(jì)釋放84.71%。黃芩苷溶液釋藥符合Weibull模型，其方程為：（略）決定系數(shù)R2為0.9765。黃芩苷PLGA微球藥物釋放符合Ritger-Peppas模型，其方程為：

8、（略），決定系數(shù) R2為0.9920，其n值為0.6525。建立了高效液相色譜法測定血漿樣品中黃芩苷的濃度，方法準(zhǔn)確度好，精密度高，滿足測定要求。大鼠靜脈注射黃芩苷和黃芩苷 PLGA微球的不同時(shí)間取血測定血漿藥物濃度 PKSolver藥動學(xué)軟件以 AIC作為判別指標(biāo)進(jìn)行各房室模型擬合，結(jié)果黃芩苷溶液和黃芩苷 PLGA微球均較符合二室模型。黃芩苷溶液的消除半衰期（t1/2β）為1.27 h，平均駐留時(shí)間（MRT）為0.88h，藥時(shí)曲線下面

9、積（AUC0-inf）為3.74μg·h·mL-1。黃芩苷PLGA微球的t1/2β為258.98 h， MRT為373.01h，藥時(shí)曲線下面積為308.14μg·h·mL-1。穩(wěn)定性試驗(yàn)中，黃芩苷 PLGA微球在60℃熔融聚結(jié)，在4℃、25℃和40℃條件下穩(wěn)定；高濕環(huán)境下微球略有吸潮水解，大部分球型無明顯變化；微球置于4500lx光照條件下放置10d后各指標(biāo)無明顯變化；加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)表明黃芩苷溫度性良好。
　　結(jié)論：采用O/W