僵蠶酶法水解工藝研究.pdf

1、僵蠶是蠶蛾科昆蟲家蠶(Bombyxmori)4-5齡幼蟲感染(或人工接種)白僵菌(Beaueriabassiana(Bals)Vuill)而致死的干燥蟲體，為傳統(tǒng)的中藥。僵蠶含灰份6.34﹪、蛋白質(zhì)67．44﹪、水分¨．31﹪、脂肪4.38﹪，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，僵蠶具有抗驚厥作用、抗凝、抗血栓、促纖溶、催眠作用、抗癌作用、降糖、降脂作用等作用。 本文綜述了近年來對(duì)僵蠶的成分分析、藥理學(xué)研究、酶法水解在中藥提取中的應(yīng)用的研究進(jìn)展以及可視

2、化優(yōu)化方法的原理及應(yīng)用，并主要研究了僵蠶的酶解工藝以及酶解以后水解度對(duì)分子量及其分布的影響，以期能在以后的藥理學(xué)研究中獲得更好的效果。 本課題主要做了以下三個(gè)方面的的工作： (1)首先用微量凱氏定氮法測(cè)定實(shí)驗(yàn)所采用的原料僵蠶的蛋白質(zhì)含量，并以水解度為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)法考察水解時(shí)間、中性蛋白酶加入量、水解溫度、pH值、激活劑CaCl2加入量對(duì)水解度的影響，得出各個(gè)單因素條件的最佳值。原料僵蠶的蛋白質(zhì)含量測(cè)定的結(jié)果為53

3、.25﹪，比文獻(xiàn)報(bào)道的稍低。 (2)在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用L25(56)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得出工藝條件各個(gè)最佳值，并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析得出各個(gè)影響的因素的主次順序?yàn)椋簻囟鹊挠绊懽畲螅浯问枪桃罕?，而后是水解時(shí)間、酶加入量和pH值，CaCl：的加入量影響較小。然后用可視化優(yōu)化方法處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)實(shí)驗(yàn)工藝條件進(jìn)行預(yù)測(cè)得到最佳工藝條件為：酶加入量5﹪，CaCl2加入量4.5﹪，固液比1：5，洲值為6.2，水解時(shí)間7．3h，水解溫度53.

4、5'C。經(jīng)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后，證明用可視化優(yōu)化方法處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)所得到的工藝條件可信。 (3)在對(duì)水解以后的樣品的分子量及其分布的研究中，采用質(zhì)譜(MS)法進(jìn)行測(cè)量。水解前的原料僵蠶的分子量主要分布在300—1500之間，含量比較大的幾種物質(zhì)的分子量主要在500左右，而且分布的比較集中：水解后的樣品分子量主要分布在H8．1-473.4之間；含量的最大的幾種物質(zhì)的分子量主要為¨8．1、205．1和279．1；以本實(shí)驗(yàn)水解得到多肽為活